微小rna-16(microrna-16)下调表达在心肌肥厚中的作用机制研究

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1、硕士学位论文微小RNA-16（microRNA-16）下调表达在心肌肥厚中题目的作用机制研究MechanismstudyoftheroleofmicroRNA-16英文题目downregulationincardiachypertrophy姓名黄帅学号11020170所在学院医学院导师姓名单志新专业药理学入学日期2010.09.01答辩日期2013.05.30学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明

2、确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月Ⅰ汕头大学硕士学位论文全文摘要心肌肥厚是一种常见的心血管疾病，是心肌重构中非常重要的方面，晚期的结局往往会引发心力衰竭或猝死

3、。心肌肥厚分子机制相当复杂，现已证实心肌肥厚的发生与细胞周期调控，钙信号调控等多种信号途径相关，全面揭示心肌肥厚发生的分子机制对于治疗心肌肥厚尤为重要。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类内源性小片段非编码RNA，可在转录后水平调控靶基因表达，参与细胞的生长、发育、分化和多种疾病的发生发展过程。多个研究证实，miRNAs参与了心肌肥厚的发生过程。微小RNA-16（miR-16）是肿瘤学研究的热点之一。据报道，在慢性淋巴细胞白血病患者中miR-16表达下调，恢复miR-16表达可起到抑制肿瘤的作用。miR-16是心肌组织中中等丰度表达的miRNA，其在心肌肥厚

4、中的作用尚无报道。拟通过腹主动脉缩窄(AAC)手术，制备大鼠心肌肥厚模型，研究miR-16在发生肥厚的大鼠心肌中的表达和在心肌肥厚中的调控作用，并进一步明确调控miR-16表达的信号转导通路。已有研究显示，细胞周期素（Cyclin）在心肌肥厚时表达增强，推动细胞周期由G1向S期转化，进而促进心肌细胞肥大。我们发现，miR-16在心肌肥厚时表达下调，生物信息学分析提示，CyclinD1、CyclinD2和CyclinE1基因的3’UTR存在miR-16潜在的作用位点。本文提出以下科学假设：miR-16下调可促进CyclinD1、CyclinD2和CyclinE1表达，推动

5、细胞周期由G1向S期转化，进而促进心肌细胞肥大。第一部分大鼠腹主动脉缩窄（AAC）致心肌肥厚模型的制备和鉴定目的建立因后负荷增加引起的大鼠心肌肥厚模型。方法选用SD大鼠，体重约220g～250g，随机分四组，即假手术组（Sham）、模型AAC1周（AAC-1w）、AAC2周（AAC-2w）、AAC3周（AAC-3w），每组8只。模型组采用0.3mm的动脉银夹缩窄大鼠的腹主动脉，假手术组只分离腹主动脉，不造成缩窄。利用小动物B超检测心脏结构和功能。通过心肌切片的HE染色，观察心脏形态变化。通过荧光定量PCR检测肥厚早期标志性基因心房利尿肽（ANP）、β-肌球蛋白重链（β-

6、MHC）的mRNA表达水平。采用Westernblot方法检测ANP和β-MHC的蛋白表达水平。结果AAC模型组较假手术组大鼠的心脏体积变大，左心室/胫骨长度比显著增加；在AAC-2w和AAC-3w组的大鼠，心室前后壁增大，左室间隔半径缩短；左心室短轴缩短指数（FS%）和左心室射血分数（EF%）均显著降低。ANP、β-MHC的mRNA和蛋白表达水平均显著升高。结论采用腹主动脉狭窄法成功建立了由压力后负II汕头大学硕士学位论文荷增加引起的大鼠心肌肥厚模型。第二部分miR-16在心肌肥厚中的表达变化目的明确大鼠心肌肥厚时miR-16的表达变化。方法采用荧光定量PCR，检测大

7、鼠肥厚心肌中miR-16的宿主基因SMC4、miR-16前体及miR-16成熟体水平。采用原代分离培养乳大鼠心肌细胞，经苯肾上腺素（PE）处理后，检测ANP、β-MHC、SMC4、miR-16前体及miR-16成熟体表达。结果成功建立PE诱导的大鼠心肌细胞肥大模型，心肌细胞表面积增大，细胞RNA合成增加，ANPmRNA表达显著上调。在整体心肌肥厚模型和肥大心肌细胞中，一致性地证实SMC4、miR-16前体及miR-16成熟体表达降低。结论在整体和细胞水平上证实，miR-16在大鼠心肌肥厚时下调表达。第三部分miR-16对心肌细胞肥大的调控