活化型肝星状细胞中mirna下调gremlin1表达的调控机制研究

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1、分类号密级公开UDC硕士学位论文活化型肝星状细胞中miRNA下调Gremlin1表达的调控机制研究学位申请人：曾宪一学科专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：吴江锋教授柳长柏教授艾文兵教授二○一五年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineResearchontheregulatorymechanismofmicroRNAsdown-regulatetheexpressionofGrem

2、lin1inactivatedHSCGraduateStudent:XianyiZengMajor:HumanAnatomyandEmbryologySupervisor:Prof.JiangfengWuProf.ChangbaiLiuProf.WenbingAiChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2015三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含

3、任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：内容摘要目的：miRNA在控制发育进程、细胞分化、细胞凋亡以及器官发育等扮演着关键性角色，本课题组前期研究确认了下调Gremlin1的表达可抑制HSC-T6的活化，进而逆转CCL4诱导的SD大鼠肝纤维化模型的纤维化进程。本课题的研究目的主要是筛选并确认HSC-T6中下调Gremlin1表达的miRNA，以及该miRNA抑制HSC活化的能力。方法：（1）

4、运用生物信息学软件筛选出可能下调Gremlin1表达的miRNA；（2）用荧光素酶报告基因分析法将Gremlin1的mRNA的3′-UTR全长及部分片段转染HSC-T6，通过荧光素酶的活性筛选下调Gremlin1表达的miRNA的结合区域；（3）结合生物信息学软件和荧光素酶报告基因分析法筛选可能下调Gremlin1表达的miRNA；（4）合成筛选出的miRNAMimic，将其转染HSC-T6中，通过westernblot方法验证miRNA对Gremlin1的下调作用，以及对肝纤维化相关基因（胶原蛋白、TGF-β、α-SMA

5、）表达的影响。结果：（1）运用生物信息学软件筛选出可能下调Gremlin1表达的6种保守miRNA；（2）用荧光素酶报告基因分析法筛选出下调Gremlin1表达的miRNA的结合区；（3）结合生物信息学软件和荧光素酶报告基因分析法筛选可能下调Gremlin1表达的保守miRNA有：miR-23a/b、miR-27a/b、miR-181a/b/c/d和miR-182；（4）合成筛选出的miRNAMimic，转染HSC-T6后，确认了miR-23b-3p、miR-27b和miR-182能下调HSC-T6中Gremlin1的表达

6、；miR-181b-1-3p能下调Collα1和Col1α2的表达；（5）miR-27b既能下调HSC-T6中Gremlin1的表达，又能下调HSC-T6中α-SMA、TGF-β、Col1α1和Col1α2的表达。结论：Gremlin1通过调节BMP-7/TGF-β-Smad信号通路，对HSC的活化起着促进作用，下调Gremlin1的表达可抑制HSC的活化，miR-27b、miR-23b-3p和miR-182能下调Gremlin1的表达；miR-27b能抑制HSC的活化。关键词：miRNAGremlin1肝星状细胞肝纤维化

7、ⅡAbstractObjective:miRNAsplayacriticalroleinregulationtheprogressionofdevelopment,celldifferentiation,apoptosisandorgandeveloping.Previousstudiesofourgrouphadvalidatedthatdown-regulatingtheexpressionofGremlin1couldsuppresstheactivationofHSCorreversehepaticfibrosis

8、inducedbyCCL4inSDrat.OurobjectiveistoscreenmiRNAswhichmaysuppresstheexpressionofGremlin1inHSC-T6anddecidetheirabilitytoinhibittheactivationofHSC.Methods