caspr与β-淀粉样前体蛋白在体外相互作用减少了β-淀粉样蛋白的产生

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1、硕士学位论文论文题目Caspr与β-淀粉样前体蛋白在体外相互作用减少了β-淀粉样蛋白的产生范靓丰研究生姓名刘春风马全红指导教师姓名神经病学专业名称神经变性疾病研究方向2013年09月论文提交日期中文摘要Caspr与β-淀粉样前体蛋白在体外相互作用减少了β-淀粉样蛋白的产生Caspr与β-淀粉样前体蛋白在体外相互作用减少了β-淀粉样蛋白的产生中文摘要目的：研究Caspr（Contactinassociatedprotein）与β-淀粉样前体蛋白（AmyloidPrecursorProtein，APP）之间的关系，探讨Caspr抑制β-淀粉样蛋白（amyloid-

2、β，Aβ）产生的机制，揭示Caspr在阿尔茨海默病病理机制中可能发挥的作用。方法：利用免疫荧光技术（Immunofluorescencestaining）观察Caspr在APP/PS1老年痴呆模型小鼠脑内的分布情况；通过免疫印迹法（westernblot）观察Caspr在APP/PS1老年痴呆模型小鼠和同窝野生型小鼠脑内的蛋白表达情况；以稳定表达印第安纳突变的APP的HEK-293细胞(V717F，HEK-APP)和表达内源性APP的CHO细胞为研究对象，利用细胞转染技术将质粒PCMV-Caspr-myc及它的空载体转染进细胞中，通过免疫印迹法观察细胞内APP

3、的蛋白表达情况，并利用实时定量PCR（Quantitativereal-timePCR，qPCR）的方法检测APP的mRNA表达情况；利用免疫荧光技术观察Caspr和APP在细胞中和C57BL/6J成年小鼠（雄性）大脑皮层中的共定位情况；用免疫共沉淀法（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）研究Caspr和APP的相互作用关系；将质粒PCMV-Caspr-myc转染进HEK-APP细胞中，利用酶联免疫吸附试验（ELISA）研究Caspr对APP的酶切产物Aβ（Aβ40和Aβ42）的影响；用MTT比色法检测转染Caspr后对细胞活性的影响。结

4、果：免疫荧光法显示，在APP/PS1老年痴呆模型小鼠的大脑皮层中，Caspr高度聚集在老年斑周围；Westernblot显示，与对照组相比，Caspr在APP/PS1老年痴呆模型小鼠的大脑皮层中表达增加；Westernblot和qPCR结果表明，在HEK-APP和CHO细胞中，过表达Caspr使APP蛋白的表达量下降，但并不影响APP的mRNA水平；通Caspr与β-淀粉样前体蛋白在体外相互作用减少了β-淀粉样蛋白的产生中文摘要过免疫荧光技术发现，不论是在小鼠大脑皮层还是细胞系中，Caspr和APP都共定位于细胞膜上，并且Co-IP证实它们是有相互作用的；EL

5、ISA结果显示，Caspr能抑制APP的酶切产物Aβ（Aβ40和Aβ42）的产生，但是Aβ42/Aβ40的比值不受影响；MTT比色法证实转染Caspr后细胞活性并没有受到明显影响。结论：在APP/PS1模型小鼠皮层中，Caspr表达增加并聚集在老年斑周围。Caspr与APP相互结合，Caspr通过转录后调控机制减少了APP蛋白的表达，并且抑制导致老年斑形成的Aβ的产生。由此，我们的研究发现Caspr参与了阿尔茨海默病病理机制，其有可能是治疗AD的一个新的药物靶点。关键词：Caspr；阿尔茨海默病；β-淀粉样蛋白；β-淀粉样前体蛋白；神经退行性疾病作者：范靓丰指

6、导教师：刘春风马全红IIIAbstractCasprinteractionwithAmyloidPrecursorProteinreducesamyloid-βgenerationinvitroCasprinteractionwithAmyloidPrecursorProteinreducesamyloid-βgenerationinvitroAbstractObjective:ToinvestigatethefunctionofCaspronthegenerationofAβinvitro,andthereforetoexploreanovelfunctio

7、nofCasprinADpathology.Methods:ImmunofluorescencestainingandWestern-blotanalysiswereusedtodetecttheexpressionpatternofCasprinthecoronalcerebralcortexofAPP/PS1mice.ToinvestigatethefunctionofCaspronexpressionofAPP,wetransfectedPCMV-Caspr-mycintoHEK-APPcellsandCHOcells.Celllysatesweresu

8、bjectedtoWestern-bl