兔传代骨髓间充质干细胞的筛选及其成骨能力的研究

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1、分类号R683.4学校代码10601密级公开编号Y1002107硕士学位论文兔传代骨髓间充质干细胞的筛选及其成骨能力的研究学科专业：外科学研究方向：骨组织工程研究生姓名：茹嘉学号：1002107学位类型：科学学位导师姓名：李强教授二O一三年四月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明

2、确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日----------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论

3、文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日目录兔传代骨髓间充质干细胞的筛选及其成骨能力的研究....………......5中文摘要…………………………...…………………………………5ABSTRACT……………………………………………………………7英汉缩略对照…………………………………………………………10前言……………………………………………………………………151材料与方法……………………………………………………151.1实验材料及

4、实验试剂……………………………………………151.2实验方法…………………………………………………………152结果…………………………………………………………………232.1原代细胞观察……………………………………………………232.2传代细胞观察……………………………………………………232.3组织学染色CD44免疫学染色……….…………………….….…..232.4CD44免疫学染色………………….….…………………….….…..232.4MTT检测细胞增殖周期…………………………………………...242.5流式细胞仪检测细胞周期……………………………………….

5、..242.6倒置显微镜观察诱导后细胞形态………………………………...242.7Ⅰ型胶原免疫组化染色…………………………………………….242.8碱性磷酸酶酶标法检测…………………………………………...242.9钙结节茜素红染色………………………………………………...253讨论………………………………………………………………263.1BMSCs的分离与纯化方法……………………………………273.2BMSCs体外培养及形态学观察…………………………………...293.3BMSCs细胞增殖…………………………………………………...303.5流式细胞仪检测BMSC

6、s细胞周期……………………………….3133.6BMSCs向成骨细胞分化…………………………………………...334结论…………………………………………………………36参考文献…………………………………………….……….37附图……………………………………………………………………..42综述…………………………………………………………………….46攻读学位期间发表的学术论文目录………………………………….61致谢…………………………………………………………………….624兔传代骨髓间充质干细胞的筛选及其成骨能力的研究中文摘要目的：1.本研究从兔骨髓液中分离骨髓间充质

7、干细胞（BMSCs），进行体外培养，旨在建立一套行之有效的体外分离，培养BMSCs的方法。2.通过各代观察BMSCs的形态，检测不同代BMSCs的细胞增殖周期和细胞生长周期，从而了解各代BMSCs的生物学性状以及初步确定作为理想的组织工程种子细胞的理想代数。3.BMSCs在成骨诱导液的诱导下向成骨细胞特定分化，通过检测成骨细胞特有指标Ⅰ型胶原，碱性磷酸酶和钙结节的表达，了解BMSCs向成骨细胞方向分化的能力。方法：1.利用骨穿针在兔股骨抽取骨髓液，利用密度梯度离心法联合贴壁细胞筛选法对BMSCs进行体外培养，观察细胞的生长情况。2.观察各代细胞形态并且测定各代细