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《人骨形成蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、四川大学学报(医学版)2008;39(5):723-727JSichuanUniv(MedSciEdi)人骨形成蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究△江标,李明,曹豫江重庆医科大学附属儿童医院骨科(重庆400014)【摘要】目的探讨人骨形成蛋白9(humanbonemorphogenetic9,hBMP29)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性。方法采用阳离子脂质体介导hBMP29基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷
2、酸酶(ALP)活性定量测定及VonKossa’s钙结节染色;MSCs与聚乳酸2羟基乙酸(polylactide2co2glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的黏附、生长情况;将转染与未转染hBMP29基因的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4、8周后进行HE染色观察。结果流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%;转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),VonKossa’s钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明
3、显大于未转染组;荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCs在PLGA支架上的黏附、生长良好;异位回植术后4、8周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染MSCs,BMP29能刺激MSCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成;BMP29基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PLGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性。【关键词】骨髓间充质干细胞BMP29PLGA组织工程【中图分类号】R782EctopicBoneFo
4、rmationofBoneMarrowMesenchymalStemCellswithGeneTransferofHumanBone△MorphogeneticProtein-9GeneinRabbitJIANGBiao,LIMing,CAOYu2jiang.DepartmentofPediatricOrthopaedics,Children’sHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400014,China【Abstract】ObjectiveToinvesti
5、gatethemethodcombininghBMP29genetherapywithtissue2engineeringtechniquestoimproveosteogenesisinanectopicboneformationmodelinrabbits.MethodsRabbitmarrowMSCsweretransferredwithBMP29genebycationicliposome,andthenweresubjectedtoaseriestestsincludingfluorescentmicro
6、scope,Flowcytometer(FCM),ALPactivityquantitativeassayandVonKossa’scalciumnodusstaninig;MSCstransfectedwithBMP29genesuccessfullywereseededontoscaffoldsofpolylactide2co2glycolide(PLGA).Cell2matrixinteractionswereobservedwithfluorescentmicroscopyandscanningelectr
7、onicmicroscopy.Thetissue2engineeredboneswithMSCsseededonPLGAwerefurthersubcutaneouslyimplantedintorabbits.Theimplantswereevaluatedwithhistologicalstainingat4and8weeksaftersurgery.ResultsThegenetransferefficiencyofMSCstransfectedwithBMP29genewas34.15%,whichwasm
8、easuredbyFCM.TheALPactivityofMSCswithBMP29genetransferwashigherthanthatofnon2transferedcells(P<0.01).ThecalciumnodusformationofMSCswasenhancedbythegenemodificationofBMP29gene.MSCss
