神经干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠的研究

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster(doctor)ThestudyoftheneuralstemcellstransplantationforthetreatmentofvasculardementiaratsBySunGuifangSupervisor：Prof．ZhangBoaiDepartmentofNeurologyTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMarch2014原创性声明本人郑

2、重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：矽他年6月／日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索

3、，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：j幻／妒年f月／日摘要神经干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠的研究摘要第一部分大鼠神经干细胞的培养及慢病毒介导GFP转染的实验研究目的原代培养神经干细胞，并在体外继续分裂增殖、稳定传代，慢病毒介导GFP转染神经干细胞后，可做为移植的种子细胞，满足细胞移植需要。材料与方法以健康孕15天Wistar大鼠为实验动物，体外分离并原代培养神经干细胞，之后传代培养，并

4、进行单细胞克隆实验。免疫荧光法和免疫组化SP法对神经干细胞分进行鉴定，Lentivirus介导转染NSCs。垂士里皇日示1．原代培养细胞可形成数十个细胞聚集而成的小神经球(Neurosphere)神经球逐渐增大，7天时神经球己生长成为数百个细胞的大克隆，即可传代培养。传代第7天时已再次长成为数百个细胞聚集的大克隆，将细胞连续传代，细胞的生长模式基本相同。2．原代培养的神经球经分散、再扩增得到的大量神经球呈nestin抗原阳性；神经球可以分化为三种细胞，免疫荧光法和免疫组化SP法检测三种细胞分别呈NSE、CNP、GFAP阳性。3．慢病毒介导GFP转染NSCs

5、后，荧光显微镜下观察，可见NSCs携带绿色荧光。结论1．从大鼠胚胎(孕15天)脑组织中分离的神经干细胞在体外可继续分裂增殖、摘要稳定传代，可满足细胞移植需要。2．慢病毒介导GFP转染神经干细胞，标记后的神经干细胞做为移植的种子细胞，便于在动物体内进行跟踪研究。关键词：神经干细胞；传代；GFP；目的第二部分NSCs移植治疗大鼠血管性痴呆将慢病毒介导GFP标记的NSCs通过海马立体定向注射的方法移植到血管性痴呆模型大鼠，使海马周围的NSCs数量增加，用Moms水迷宫检测系统对实验大鼠作定位航行试验和空间探索实验测试，检测大鼠的学习记忆能力的改变，观察NSCs移

6、植的治疗效果。材料与方法月龄12～15个月健康成年Wistar大鼠，体重300"---4009，用来制备血管性痴呆2VO模型；传代至第6代的Wistar大鼠神经干细胞，GFP标记后于2VO模型造模35天后海马立体定向注射移植，对假手术组、对照组、NSCs移植组海马组织切片做尼氐染色，观察病理学改变；在缺血4、9、13．、17周(移植前和移植后4周、8周、12周)时对移植前后各组大鼠行Moms水迷宫测试，对定位航行实验和空间探索实验结果进行统计分析。结果与假手术组相比仍明显延长；NSCs移植组穿越平台区次数较对照组也明显增加(火O．05)，与假手术组相比仍明

7、显减少(P

8、hl及Hesl表达的动态改变，研究神经干细胞移植对大鼠学习记忆能力