神经干细胞移植治疗大鼠脑梗死的实验研究

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1、学校代码10459学号或申请号201212483799密级公开硕士学位论文神经干细胞移植治疗大鼠脑梗死的实验研究作者姓名：刘磊导师姓名：刘恒方教授学科门类：医学专业名称：神经病学培养院系：第五临床学院完成时间：2015年4月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterExperimentalstudyofneuralstemcelltransplantationinthetreatmentofcerebralinfarctioninratsByLeiLiuSupervisor:Prof.H

2、engfangLiuMedicine:NeurologytheFifthClinicalCollegeApril2015学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：讀年^•月乙、广日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同

3、意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：曰期:20/丄年女月对曰中文摘要神经干细胞移植治疗大鼠脑梗死的实验研究中文摘要背景目前，脑梗死（cerebralinfarction）是导致人类死亡和残疾的危害人类健康的主要疾病之一。截至当代，脑梗死造成的细胞损伤

4、和死亡仍无确实有效的治疗方法。一旦脑梗死的缺血损伤达到最大限度，就会导致不可逆的神经功能损伤，恢复到发病前的状态是非常困难的。即使是得到及时治疗，许多患者仍存在永久性神经功能缺失，遗留不同程度的残疾。近年来，国内外的研究人员研究发现多种治疗方案，从溶栓治疗到介入微创治疗，从应用多种药物或中医中药等治疗，都力求恢复脑梗死部位的血液供应，保护缺血半暗带的脑组织。这些方法虽改善了患者的临床症状，但因治疗“时间窗”等诸多因素的制约，都没能从根本上阻断脑损伤的发生或者有效地促使受损脑组织再生。因此，受损脑组织的修复与神经功能的恢复始终是人们追求的一种理想治疗结果。实验

5、研究发现，细胞移植通过其潜在的自我修复功能使受损组织得以新生。有鉴于此，研究人员把关注的焦点放在如何运用干细胞移植方法治疗脑梗死。干细胞移植治疗脑梗死，就是通过促进局部多种神经营养因子的产生；这些因子能通过清除自由基，减低兴奋性氨基酸的毒性作用等各种途径发挥神经保护作用，从而达到减少细胞凋亡的发生。通过促进血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维因子（bFGF）等因子的产生而刺激血管新生，增强局部脑血流量而对抗缺血的损伤。因此，本实验通过选取具有完整个体分化潜能的胚胎干细胞移植到脑梗死大鼠模型内，探讨其在体内增殖、分化情况及疗效。目的探讨神经干细胞移植治疗脑

6、梗死大鼠神经功能损伤的可行性及疗效。I中文摘要方法用线栓法将成年雄性大鼠制成大脑中动脉脑梗死模型，模型成功后随机分为实验组25只和对照组25只，取孕15d胎鼠的大脑皮层和海马区脑组织提取培养的神经细胞，经nestin表达阳性鉴定为神经干细胞，实验组经尾静脉注射1µL神经干细胞悬液，对照组经尾静脉注射1µL生理盐水，在移植后1d、3d、7d、14d、28d依据Garcia的18分评分法对各组大鼠的神经功能进行评分，行脑灌注固定取材，通过免疫组织化学染色方法观察移植后神经干细胞的分化、迁移和整合情况。结果1.体外分离培养的神经细胞在无血清培养液中形成大量的神经球

7、。经3—5代传代的细胞生长稳定。经nestin染色鉴定大部分为阳性细胞，神经细胞球经胎牛血清培养液贴壁培养后可分化为表达神经元特异烯醇化酶（NSE），胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、半乳糖脑苷脂（GALC）表达阳性的细胞。2.移植后大鼠神经功能评分：缺血移植组大鼠的神经功能评分与对照组比较显著升高（P<0.05）；缺血移植组大鼠的神经功能评分在28d较14d时显著升高（P<0.05）。结果显示缺血移植组与对照组比较神经功能评分显著升高，结果有差异性，结果差异显著（P<0.05）。3.免疫荧光染色，行免疫组织化学染色能够检测到存活的Brdu阳性细胞，移植后28d

8、可见移植细胞向周围迁移、分化，参与血管形成，并可见梗