人神经干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

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1、中山大学硕士学位论文人神经干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究姓名：贺晓玉申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：沈慧勇20070429◇!，．生慧耋硕士学位论文人神经干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究基础。研究方法：取2—3个月流产胎儿海马区组织培养神经干细胞，神经巢蛋白(nestin)抗体进行细胞免疫染色鉴定神经干细胞。移植前使用CM-DiI荧光染料标记神经干细胞。NYU打击器致大鼠TIO脊髓损伤，伤后第8天对大鼠进行BBB评分后随机分为移植组和对照组，伤后第9天进行细胞移植，通过组织冰冻切片免疫荧光化学检测NSCs存活及其向神经

2、细胞分化情况，超微结构观察轴突再生情况，BBB运动功能评分观察大鼠后肢运动功能恢复情况，分析和评价人神经干细胞异体移植对脊髓损伤的修复作用。结果：1．建立人神经干细胞体外培养体系，分离培养的细胞呈神经球样悬浮牛长，经鉴定为神经干细胞，CM-DiI标记神经干细胞，荧光强度合适，且不影响干细胞活性。2．组织问接免疫荧光染色检测到NeuN、CNPase、GFAP、MBP、Nestin阳性表达的细胞，激光共聚焦显微镜观察提示hNSCs在成鼠损伤脊髓中可分化为神经元、少突胶质细胞及星型胶质细胞：并且术后8周仍有部分NSCs保持未分化状态。移植组穿

3、越瘢痕区的再生轴突多于对照组、从伤后第4周起移植组BBB运动评分明显高于对照组。结论：1．CM-DiI标记NSCs方法简单，对细胞生物学活性无影响，能够满足体外活细胞观察及体内移植示踪需要，是标记神经干细胞较为理想的示踪方法。2．NSCs移植入体内可以长时间存活，NSCs移植入体内可分化神经元、少突胶质细胞及星型胶质细胞，能有效改善脊髓损伤后微环境，促进神经轴突再生和延长，有效促进神经的再生和修复。关镅!词：神经干细胞脊髓损伤细胞移植II‘疹曼l_毫曼顿士学位论文人种经干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究Theresearchoftra

4、nspIantationofhumanneuralstemcellsintoinjuredspinalcordofratsDepartmentofOrthopedics，SecondAft'dintedHospital,SunYat-senUniversityPostgraduate：HeXiao-yuSupervisor：Pro￡ShenHui-yongAbstractBackgroundSpinalcordinjury(SCOisadiseasewhichseriouslydamageshumanhealth．Recently,th

5、eincidenceofspinalcordinjuryisgoingupwitllthedevelopmentofmoderntrafficandbuildingindusU'y．InAmerica,itisreportedthatthenumberofpeoplesufferedspinalcordinjuryiseleventhousandeachyear．Inourcountrysixtypersonsineachmillionpeopleencounterthateveryyear．Belowtheinjuredsegment

6、oftenlossthesenseandmotionfunctiontodifferentextentandurinaryandfecalincontinenceafterspinalcordinjury．Thisnotonlybringspatientsphysiologicalandpsychicsufferinginlifebutalsobringsdowntheirlifequality,meanwhile，bringsfamilyandsocietyaheavyburden．Curingspinalcordinjuryisal

7、waysadifficultandhotpointinneuroscienceresearch．It'sbelievedthatnormalmaturemammaliancentralncrvonssystem(cNs)couldn’tregenerateafterinjured,becauseofpoorregenerationcapabilityofneuronandtheinhibitorformglialmicroenvironment．AguayoreportedthattheinjuredcentralneTvonsaxon

8、scallregenerateinsuitableenvironmentin1981．whichwastoheabreakthroughpointofviewonrecoveryofCNSafterinju