神经干细胞移植治疗脑出血的实验研究

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1、《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R322.81学号：S110043贵阳医学院2014届硕士研究生学位论文神经干细胞移植治疗脑出血的实验研究研究生：王铭杨导师：康朝胜副教授尹浩教授年级：2011级专业：人体解剖与组织胚胎学2014年5月12日万方数据目录摘要…………..…………………………………………………...……1第一部分胚鼠神经干细胞的分离、培养、分化及绿色荧光蛋白标记前言...............................................................................................

2、..........2材料与方法…………………………………………….………….……4结果……………………………………………………….…….……7讨论…………………………………………………………….……10参考文献……………………………………………………….……….12第二部分神经干细胞移治疗自发性高血压大鼠脑出血的实验研究前言………………………………………………………..……...…14材料与方法…………………………………………………..………...15结果……………………………………………………..…………...25讨论…………………………………………………..…………...…3

3、6结论…………………………………………………..……...………43参考文献……………………………………………..…………...……44英文摘要……………………………………………..……………...…46致谢…………………………………………..…………………....…48略缩词表…………………………………………………..…...……….49论文原创性声明…………………………………………..………...…50附：综述……………………………………..………………………51万方数据贵阳医学院2014届硕士研究生论文神经干细胞移植治疗脑出血的实验研究专业:人体解剖与组织胚胎学研究生:王铭杨

4、导师:康朝胜副教授尹浩教授【摘要】目的观察NSCs移植到脑出血大鼠后的存活、迁徙、分化情况。研究NSCs对脑出血大鼠神经功能损害的可能修复作用。方法：体外分离培养和鉴定GFP胚鼠NSCs；选取SD大鼠120只，采用Ⅳ型胶原酶诱导法建立大鼠脑出血模型，并随机分成三组：A组40只为单纯脑出血组；B组40只为脑出血+培养液移植组：C组40只为脑出血+NSCs移植组。三组大鼠分别在NSCs移植后6h，24h，3d，7d，14d，21d，28d用肢体功能测试方法进行运动神经功能评分；在NSCs移植后6h，24h，3d，7d，14d每组各取5只大鼠处死，取脑组织匀浆，分别检测各组5个时间点大鼠

5、脑组织内VEGF的表达；在NSCs移植后14天每组取5只大鼠灌注取脑，以免疫组织化学方法进行脑组织微血管密度检测，并用统计学方法分析。结果胶原酶IV制作脑出血模型脑内血肿边界清楚、形态规则，肢体功能障碍明显；GFP标记的神经干细胞移植入脑出血大鼠后可见其在脑内存活，主要分布于血肿腔周边，免疫荧光检测显示移植细胞能进一步分化为神经元及星形胶质细胞；从移植术后第2l天到第28天，神经干细胞移植组大鼠的神经功能改善显著好于培养液移植组和单纯脑出血组,与其他两组相比，C组VEGF表达显著提高(P<0.05)，微血管密度明显增强(P<0.05)，肢体运动功能缺损明显得到改善(P<0.05)，

6、有统计学意义(P<0.01)。结论GFP标记胚胎大鼠NSCs脑内移植能有效的提高脑出血模型大鼠脑内VEGF的表达，促进血肿周围血管生成，并能够改善运动神经功能障碍。【关键词】GFP;神经干细胞；脑出血模型；移植；形态1万方数据贵阳医学院2014届硕士研究生论文第一部分胚鼠神经干细胞的分离培养及GFP标记前言神经干细胞(neuralstemcells，NSCs)是神经系统发育过程中保留下来的具有自我更新和多向分化潜能的原始细胞，可分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等多种类型的神经细胞，其迁移和播散能力强，且免疫原性低、无致瘤性，是治疗神经系统类疾病理想细胞供体。近年来，关于NS

7、Cs多潜能性具有新的认识，有实验证明NSCs具有很强的跨系或跨胚层分化潜能，如NSCs能够转分化为造血细胞并重建造血系统，NSCs还可分化为肌细胞，因此有人也将[1]NSCs称为神经多潜能干细胞。在胚胎期哺乳动物中，已先后从大脑皮质、海马区、纹状体、嗅球、脑室沿线包括侧脑室、第三脑室和第四脑室、间脑、中脑、[2]小脑、脊髓和视网膜中成功分离获得NSCs。而成年哺乳动物NSCs通常是指神经前体细胞，主要存在于室管下区(subventficularzone，SVZ)、海马