BMSCs移植治疗脑出血损伤大鼠的实验研究

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1、分类号：R742密级：学位类别：科学学位口专业学位团学校代码：1062学号：2010602735学科门类：医学又肄篑科矢普零季裁树Ji鞫MEDIe矗L0鞫lVERSllY硕士学位论文MASTER’SDISSERTATIoN论文题目：BMSCs移植治疗脑出血损伤大鼠的实验研究TITLEHumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsTransplantationfortreatmentofcerebralhemorrhageinjuryinrats一级学科：临床医学二级学科：神经病学论文作者：杜从斌指导教师：王世民导师组成员：阎晓玲苏心韩彤王新平天津医科大学研

2、究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：趔日期：吲弓年?月多日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有

3、关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密囱。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：趣丛日期：伪睁‘月7日导师签名：劂日期：吵B年‘月3日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：研究BMSCs移植对大鼠出血性脑损伤后神经功能恢复的影响，并探讨其可能的治疗机制。方法：采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离绿色荧光蛋白转基因大鼠BMSCs。采用向成年雄性SD大鼠右侧苍白球立体定向注射胶原酶的方法诱导脑出血动物模型，将实验动物随机分为盐水组、模型组与移植组，模型组、移植组右侧苍白球各注射2ul用无菌生理盐水稀释的Ⅶ胶原酶，盐水组注射等量生理盐水。移植组造模后2h采用

4、同样方法移植BMSCs，盐水组及模型组大鼠不做处理。采用mNSS神经功能损伤程度评分法检测大鼠神经系统功能恢复情况，Morris水迷宫观察比较大鼠移植前后的行为学变化，核磁共振扫描观察大鼠移植后脑组织影像学改变。造模后1d、3d、7d、14d和28d处死大鼠，通过免疫组织化学法和ELLISA法，观察移植后的BMSCs在大鼠脑内存活、分化情况和炎性因子、神经营养因子等指标变化，以及对细胞凋亡的影响。结果：1．通过密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离大鼠BMSCs，经流式细胞仪检测所分离出的细胞，结果显示细胞表达CD90和CD29，符合BMSCs的形态及细胞表面标志物等特性，并且可在体外进行分

5、化、传代、扩增，具有良好的自我更新能力和多向分化潜能，证实分离所得细胞为BMSCs；2，采用向大鼠右侧苍白球立体定向注射胶原酶的方法诱导脑出血动物模型，大鼠神经功能缺损明显，造模后6h行MRI检查，T1WI序列显示右侧纹状体相应层面小片状低密度影，证实造模成功。3．BMSCs移植后第1、3、7、14和28天，移植组mNSS评分低于模型组。4．移植组大鼠TNF．a表达和细胞凋亡水平均显著降低，而BDNF蛋白的表达则显著提高，脑组织可见极少量GFP+NeuN、GFP+GFAP阳性细胞。结论：(1)BMSCs可以在体外分离、培养、传代、扩增。(2)采用SD大鼠右侧苍白球立体定向注射胶原酶的方

6、法诱导脑出血动物模型较稳定，可用于脑出血动物实验研究。(3)BMSCs移植可以显著降低TNF．a表达和细胞凋亡水平，提高脑出血后BDNF蛋白的表达，在宿主脑内存活并少量分化为神经元样细胞和神经胶质细胞样细胞，促进脑出血大鼠肢体运动功能和空间学习记忆能力恢复。(4)BMSCs移植安全有效，有望成为治疗脑出血的新手段。关键词：脑出血Ⅶ胶原酶BMSCs立体定向移植TNF-a天津医科大学硕士学位论文AbstractOBJECTIVE：Tostudytheeffectsofbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)onrecoveryofneurologicalf

7、unctionincerebralhemorrhagediseasemousemodle，andtoexplorethetherapeuticalandpotentialmechanism．METHODS：WeCanseparategreenfluorescentproteintransgenicratBMSCsbydensitygradientcentrifugationandadherencescreeningmethod．wecaninj