人脐血干细胞移植治疗大鼠脑出血的实验研究论文

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1、人脐血干细胞移植治疗大鼠脑出血的实验研究论文.freelanumbilicalcordbloodcells，HUCBC）移植治疗脑出血大鼠的效果及HUCBC在出血大鼠脑内的状况。方法采集足月新生儿脐带血60～100ml.freelanumbilicalcordstembloodcells(HUCBC)transplantationtotreatintracerebralhemorrhagicratsandthestatusoftransplantedHUCBCinthehemorrhagicbraintissueoftheserats.MethodsHUCBCgotfrom

2、theplacentaoffull-termbabiesarkedol/l)fortorrhage(ICH)modelsmunohistochemistrymethodigrationanddifferentiationofHUCBCinrats.ResultsTheHUCBChadthecapacityofproliferationinvitro.Tuchbetterthantheratsodeoxyuridine(Brdu)reactiveHUCBCajorityofcellslocalizedinthehemorrhagichemisphereandfeisphere

3、.Afecellsmarkersneuroepthelialstemcellprotein(Nestin)andtheneuronalmarkersneuron-specificendase(NSE)，butmoreHUCBCarkerglialfibrillaryacidicproten(GFAP).ConclusionTheHUCBChadthecapacityofproliferation、migrationanddifferentiationpropertiesinvivo，thetransplantedcellsdifferentiatedintoastrocyt

4、esandneuronsbytheinflucenceofthehemorrhagicmicroenvironmentalsignals.HUCBCtransplantationmayprovideanovelapproachtotreatcerebralhemorrhage.【Keyanumbilicalcordstembloodcells；transplantation；cerebralhemorrhage脐血中富含造血干/祖细胞，间充质干细胞以及内皮干/祖细胞等，具有较强的增殖、分裂能力，可以向神经细胞方向分化。本实验主要探讨在大鼠脑出血的情况下经尾静脉注射移植人脐血

5、干细胞（humanumbilicalcordbloodcells，HUCBC）的可行性，对中枢神经系统损伤修复的作用和可能的机制。1材料与方法1.1材料1.1.1动物及分组成年雄性SD大鼠（上海实验动物中心提供）30只，质量270～320g。30只SD大鼠于模型制作过程中因麻醉等原因死亡2只，模型制作不成功4只，其余24只模型制作成功大鼠随机分为(1)对照组（6只）；(2)生理盐水组（9只）；(3)HUCBC移植组（9只）。1.1.2主要试剂与仪器（1）试剂：人淋巴细胞分离液（1.077，天津产），人红细胞裂解液，细胞培养试剂DMEM/F12（1：1，Gibco），B27添

6、加剂（Gibco），5-溴脱氧嘧啶尿苷（Brdu，Sigma），抗菌素-抗真菌复合物（青霉素、链霉素、两性霉素，Gibco），Ⅶ型胶原酶（Sigma）。小鼠抗人巢蛋白（Nestin）单抗（BD公司），小鼠抗人神经元特异性烯醇化酶（NSE）抗体（Chemicon），小鼠抗人胶质纤维酸性蛋白（GFAP）抗体（Chemicon），抗5-溴脱氧嘧啶尿苷（Brdu）单抗（Sigma）。（2）仪器：立体定向仪，超净台，细胞培养箱，Olympus倒置显微镜XDS-18，密度梯度离心机，10μl微量进样器。1.2方法1.2.1制备脐血单个核细胞（mononuclearcell，MNC）悬液

7、参照Ha［1］等人方法采集脐血单个核细胞，以1×106/ml的细胞密度接种于含10mlDMEM/F12的培养皿中，同时Brdu（终浓度5μmol/l）标记，置于含5%CO2的细胞培养箱中培养48h后PBS反复离心洗涤制备密度为6×106/ml的MNC悬液。1.2.2脑出血大鼠模型制作参考Rosenberg等［2］的方法，大鼠麻醉后固定于立体定向仪上，头顶部去毛消毒后正中纵向切口，于前囟偏右旁开3.2mm，向后1.4mm处在颅骨上钻一小孔，用10μl微量进样器进针5.6mm，即苍白球位置［3］，缓慢注入2μl含0.4