乙型肝炎病毒前s1缺失突变对病毒生物学活性的影响研究

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1、独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得(洼；如遗查甚丝茬墓挂型直盟鲍：奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：撇签字日期：Ⅵf汗j、月研曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解XXXXXXX有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权XXXX

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3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．66日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．1研究对象⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．81．2实验主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．81．3实验主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．91．4患者血清HBVDNA的提取⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101．5HBV全基因组序列扩增及克隆测序⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．111．6提取目的质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l71．7HBV基因型的分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．181．8临床资料分析以及前S缺失突变比率的计算⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯191．91．0倍全长HBV复制子的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．191．10细胞的冻存、复苏、传代、分板和1．0倍HBV的瞬时转染⋯⋯⋯．．201．11收集上清分泌的I-IBsAg及细胞内HBV核心颗粒的提取⋯⋯⋯⋯⋯221．12细胞的瞬时转染及HBVR

5、NA的定量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．241．131．1倍pTriEx—I-IBV(C)重组载体的构建及前Sl抗原检测⋯⋯⋯⋯．．271．14HBVpGL3．SPII荧光素酶表达载体的构建及报告基因检测⋯⋯⋯．．282结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．342．1HBV全基因组序列扩增产物鉴定结果，临床资料分析及前S缺失在各组患者检出率分析、基因型分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．342．2代表性前Sl缺失株及相应野生株1．0倍HBV复制子的鉴定及序列分析，复制力测定、rmsAg分泌、RNA水平结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3

6、62．31．1倍pTriEx-rmV(C)重组载体的鉴定及前Sl抗原的检测结果⋯⋯4l2．4pGL3．SPII荧光素酶表达载体的鉴定及前Sl缺失对SPII启动子转录活性影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．433讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．454结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．52乙型肝炎病毒前S

7、l缺失突变对病毒生物学活性的影响研究中文摘要目的；分析乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)前S缺失突变在慢性乙型肝炎轻中度、慢性乙型肝炎重度和慢加急性肝衰竭患者中的检出率；分析前Sl缺失突变病毒株体外复制力、HBsAg分泌、RNA水平、前S1抗原表达及其对表面抗原启动子II(SurfaceantigenpromoterII，SPII)转录活性的影响。方法：研究对象为119例于2005年8月一2008年5月在解放军第三。二医院诊疗的住院患者，包括38例慢性乙型肝炎(以下简称慢乙肝)轻中度、40例慢乙肝重度和4l例慢加急性肝衰竭患者。从