资源描述：
《乙型肝炎病毒前s基因区缺失突变发生机制的探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn第18卷第4期病毒学报Vol.18No.42002年12月CHINESEJOURNALOFVIROLOGYDec.2002乙型肝炎病毒前S基因区缺失突变发生机制的探讨蒋栋,许军,李若冰,丛旭,费然,陈红松,魏来,王宇(北京大学肝病研究所北京大学人民医院,北京100044)摘要:检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者和患者外周血内HBV前S区基因缺失突变的分子结构特点,探讨其发生机理。用聚合酶链反应方法从慢性乙肝患者和携带者血清中扩增出前S区基因片段,克隆、测序,分析缺失发生的结构特点,从而推测这些前S区基因
2、缺失突变的产生机制。从262例慢性乙肝患者和103例无症状HBV携带者体内扩增出前S区片段,共在30例患者和携带者中检测出多种前S区基因缺失突变,主要集中于前S1区的3′端和前S2区的5′端。其中有9例患者和携带者体内存在完全一样的nt3019～nt3201183bp的缺失突变,该缺失突变符合真核细胞mRNA剪接机制,在此位置上各基因型的序列高度保守。同时有另外两种缺失突变,即nt3019～nt3147129bp缺失、nt3019～nt310991bp缺失也符合该剪接机制。有23种缺失突变部分于重复序列之间,符合逆转录过程中的模板转换机制所导致的缺失。根据前基因组R
3、NA预测出二级结构,仅部分缺失突变在RNA二级结构中对应于局部的结构。此结果表明:HBV在外界因素mRNA的剪接机制和内在因素聚合酶蛋白的功能特点的共同作用下,产生各种突变,不同的机制将导致不同类型的缺失突变。除真核细胞mRNA剪接机制外,逆转录过程中的模板转换是主要机制之一。关键词:乙型肝炎病毒;缺失突变;剪接机制;逆转录;模板转换中图分类号:R373121;Q754文献标识码:A文章编号:1000-8721(2002)04-0317-08乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)是一个小DNA病毒,导致急性和慢性肝炎,是严重危害人类健康的传材料与方法染病之一。HBV在感染过
4、程中常发生变异,导致感染的慢性化和治疗失败。HBV聚合酶校对功能较1对象262例慢性肝病患者来源于北方地区医院住院患差,是造成点突变的基础,如1896位的G→A,1762者,年龄6～74岁(3918±1211岁),男性198例,女性64例。位的A→T,1764位的G→A,687位的G→A(表面103例HBV无症状携带者,年龄13～50岁(2715±813岁),男性66例,女性37例,血清转氨酶长期低于40U/ml,抗原145G→R),739位的A→G(YMDD→YVDD),无肝脏损伤的临床表现。慢性肝炎和携带者诊断符合2000741位的G→T(YMDD-YIDD)都
5、是非常典型的有年9月西安中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分重要生物学意义的点突变。[20]会联合修订的病毒性肝炎防治方案。所有病人均排除了已有研究观察到在HBV感染者肝组织和体外丙肝病毒感染及其它能导致肝脏病变的疾病。标本采集后转染细胞中,发现由mRNA剪接机制造成的亚基因-70℃保存备用。组片段缺失,可达基因组的一半,而在实验观测中常2血清HBVDNA聚合酶链反应(PCR)50μl血清加310μl[1,2,5,6][3]发现较小片段的缺失。Kidd-Ljungern等蛋白酶K裂解液裂解,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀。沉淀溶于比较了不同基因型前基因组RNA的二级结
6、构,发10μlH2O中为HBVDNA模板。上游引物为nt2816～nt现二级结构和一些缺失有较好的相关性,并推测2835,5′-GTCACCATATTCTTGGGAAC-3′;下游引物为nt409～nt428,5′-TGAGGCATAGCAGCAGGATG-3′。扩RNA的二级结构在缺失中发挥作用,然而还有很多增条件:94℃30s,55℃30s,72℃45s,35个循环,最后72℃延缺失突变不能用该机制解释。本研究调查HBVPre伸7min。取5μlPCR产物进行115%琼脂糖凝胶电泳。预-S区缺失突变的结构特点,从而推测其发生的详计扩增产物长度824bp。细机制。
7、3扩增产物克隆连接体系10μl,含1×连接Buffer,25ng收稿日期:2002-03-27;修回日期:2002-06-06pGEM-TEsayVector(美国Promega公司),315μl扩增产基金项目“:973”资助项目(G1999054106);国家自然科学基金物,3UT4DNA连接酶(美国Promega公司),4℃连接24h。资助项目(30170047)CaCl2法常规制备感受态细菌JM105。取5μl连接产物转化作者简介:蒋栋(197314),男,河北滦县人,北京大学肝病研究所后进行氨苄青霉素选择培养,蓝白斑筛选,每个连接反应至助理研究员,博士,
