江西地区免疫儿童感染的乙型肝炎病毒s基因突变分析

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1、南昌大学硕士学位论文江西地区免疫儿童感染的乙型肝炎病毒S基因突变分析姓名：周艳申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：刘金辉20120604摘要研究背景：自从1992年病毒性乙型肝炎疫苗在我国被纳入儿童计划免疫，低年龄组儿童人群HBV阳性检出率逐年下降，但与此同时，由疫苗免疫压力引发的HBV“a，’抗原决定簇变异株的出现和流行，越来越受到了人们的广泛关注，但是对江西地区免疫儿童感染的HBV“a”抗原决定簇变异情况的研究还未见报道。研究目的：本研究拟调查1996年后出生的乙肝疫苗免疫儿童HBV的感

2、染，分析所感染的HBVS基因“a，’抗原决定簇的变异，寻找可能与免疫逃避相关的变异位点，并鉴定HBV基因型和血清型，为诊疗和预防儿童HBV感染提供重要参考。研究方法：1．临床标本筛选：收集在江西省儿童医院就医的全程乙肝疫苗免疫儿童血清标本，ELISA方法检测HBV—M，筛选出HBV感染的阳性标本。2．HBV感染的统计学分析：采用≯检验分析不同年龄、性别组间免疫儿童的HBsAg阳性率的差异。3．HBVS基因的PCR扩增与测序：采用高保真PCR方法对HBsAg阳性血清进行HBVS区基因DNA扩增，PCR

3、产物直接测序。4．⋯a’抗原决定簇变异位点分析：采用DNAman软件对所测HBVS基因的核苷酸和氨基酸序列与参考序列进行比对以分析血清型和“a’’决定簇的变异。5．HBV基因型的鉴定：采用Editseq软件、Clustalx(1．83)软件和Mega4软件绘制S基因遗传进化树和使用在线Genotyping软件与参考序列比对以鉴定基因型。研究结果：1．标本采集：研究者于2010年6月．2011年5月间在江西省儿童医院采集就医的乙肝疫苗全程免疫儿童(7．39-士3．66岁)血清标本13117份，男童71

4、39人(54．42％)，女童5978人(45．58％)。2．HBsAg感染分析：从13117份血清标本中共筛选出230份HBsAg阳性标本，HBsAg阳性率为1．75％，男女儿童HBsAg阳性率分别为1．78％并111．72％，II摘要两者间的HBsAg阳性率差异不明显(尸>0．05)；每5岁设置的不同年龄段儿童HBsAg阳性率分别为1．80％、1．53％和2．00％，三者之间没有明显差异(胗0．05)；同一年龄段不同性别间免疫儿童HBsAg阳性率差异无统计学意义(胗0．05)。3．‘铲抗原决定簇突

5、变位点的检测：从230份I-IBsAglj日性标本成功扩增并测序了118份HBVS区基因，从中检测出24份标本有“a'’抗原决定簇变异，变异率20．34％。在“a'’决定簇中共发现了7个位点8种错义突变，分别为1126T／S，P127T，Q129H，S132T，P142T，S143T和G145A。HBV“a”抗原决定簇两茎环间的变异率和男女儿童感染的“a’’抗原决定簇的变异率无显著性差异(P>0．05)。4．血清型分析：氨基酸序列比对分析发现，118标本中，105份为adw血清型，均为adw2亚型；

6、7份为ayw血清型，均为aywl亚型；6份为adr血清型，adrq+4份，adrq一2份。5．基因型分析：进化树分析与在线Genotyping软件检测结果显示，118标本中，112份为HBVB基因型，占94．92％，都是B2亚型；6份为HBVC基因型，占5．08％，其中4份为C2亚型，2份为C3亚型。基因型分布在不同性别间无明显差异(胗0．05)，基因型和血清型之间未反映出异质性，存在一定的关联。研究结论：1．从1992年起将乙肝疫苗纳入儿童计划免疫管理后，江西地区儿童HBsAg阳性率有了明显的下降

7、，低于乙肝疫苗纳入计划免疫前的儿童HBsAg阳性率。2．在江西地区乙肝疫苗免疫儿童人群检测出“a”抗原决定簇变异的HBV感染，但并未发现有明显优势的变异株类型，提示S基因中“a，’决定簇的某些位点变异可能是逃避乙肝疫苗免疫导致HBV感染的机制之一。3．江西地区乙肝疫苗免疫儿童感染的HBV以adw血清型为主，并有ayw血清型和adr血清型存在。4．江西地区乙肝疫苗免疫儿童感染的HBV以B基因型中B2基因亚型为主，有少量的C基因型(C2基因亚型和C3基因亚型)；该地区儿童感染的HBV遗传距离近。关键词：

8、乙型肝炎病毒；变异；基因型；血清型；免疫；儿童江西省卫生厅科技计划项目NO：20122024IIIABSTRACT勘c曩唧出gramme恼muniza：ti。n鼢1992，mViwthHBV，vacci利ne∞ad愀apt幽edb嘶ypnrao罴：a兰：1茹，溢：赢LlJ恤-’Vcarriersin．population叭删鹋¨们mm黜需∞08蟮n1：渊_一一一。。nas竺舭刚eandepidemic咖sof—HBVw硎str押ainis扼wltbhmmu．tatio