携带tgevs和pedvs双基因的减毒沙门氏菌在猪体的免疫动态规律

《携带tgevs和pedvs双基因的减毒沙门氏菌在猪体的免疫动态规律》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据SiChuanAgriC—U1tUra1UniVersitYDISSERTATIoNSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementforMASTERDEGREEImmunedynamicregulatmnoIco-expressIng一'●-·‘^●n·^●‘1_‘J●■’proteinsoltransmlssible2astroenterinSⅥrUSandporcineeoidemicdiarrheavirusdeliveriedbyorclnedemlcdlarreaell

2、VerielayattenuatedSalmonellatyphimuriuminpigletsByZhangXiaohuiDirectedbyProf．XiaoboHuangProf．SanjieCaoProf．Xintian阮June2014万方数据本研究受下列基金项目资助、型垒)至91垒兰㈣删舢舢删删㈣特此表示感谢国家自然科学基金项目(项目编号：No．30901084；No．31072144)NationalNaturalScienceFoundationofChina(NNSFOC，PROJECTNo．30901084；N

3、o．31072144)万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川I农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：弧，J、会z。【斗年多月t2日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论

4、文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。权。口本论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授(请在以上口内划“、／’‘)跏降年‘月f／r日勿悔歹月f1日万方数据中文摘要猪流行性腹泻病毒(PEDV)与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均属冠状病毒属，引起猪的高度接触性肠道传染病，给养殖业造成了重大经济损失，且目前没有有效的药物预防，疫苗是防控这两种病的最佳选择。本实验室前期已构建了携带TGEVS和PED

5、VS的双基因疫苗SL7207(pVAXD．PSl．TS)和单基因疫苗SL7207(pVAXD—PS1)、SL7207(pVAXD—TS)，并在小鼠模型上进行了SL7207(pVAXD．PSl．TS)的免疫评价。为了进一步了解SL7207(pVAXD．PSl．TS)在猪体的免疫原性与动态规律，我们将该双基因口服疫苗在猪体进行了免疫评价，对体液免疫、粘膜免疫、细胞因子、中和试验等进行了全面的评价，为科学评价该疫苗提供依据，为后续研究提供参考。将保存的疫苗菌株SL7207(pVA_XD．PSl．TS)、SL7207(pVAXD．PSll

6、、SL7207(．)复苏培养，抽提质粒对目的基因进行和酶切鉴定，结．pVAXDTSPCR果证实携带质粒的准确性，然后将菌株扩大培养制备口服疫苗。将15头仔猪随机分成5组，双基因免疫组SL7207(pVAXD．PSl．TS)、单基因对照组SL7207(．pVAXD—PSl)$1JL7207(pVAXD—TSl、空载体对照组SL7207(pVAXD)、含5％Nat-IC03的PBS。将重组沙门氏菌以1．6x1011CFU的剂量分别口服接种3只仔猪，每头猪口服10mL，两周后以2．O×1011CFU的免疫剂量加强免疫，免疫后无临床可见病

7、变。分别在首次免疫后第0、2、4、6、8w采集仔猪血液和粪黏液样品，以ELISA检测血清IgG、Y一干扰素、IL．4、粪便黏膜IgA抗体的动态水平，以中和试验测定抗体中和效价，以MTT法检测外周血淋巴细胞增殖情况。体液免疫和黏膜免疫结果显示：免疫组SL7207(pVAXD．PSl．TS)对照组SL7207(pVAX_D—PSI)、SL7207(pVAXD-TS)均可诱导机体产生特异性的血清IgG抗体及粪黏液IgA抗体，SL7207(pVAXD．PSl．TS)能同时诱导针对TGEV和PEDV的特异性抗体。首免后第2w，免疫组SL72

8、07(pVAXD．PSl．TS)和对照组SL7207(,pVAXD-PSl)、SL7207(pVAXD—TS)特异性抗体开始增加，第4周均可检测到特异性IgG、IgA抗体；第6w抗体水平均达到最高峰，第8w抗体水平开始下降。中和实验结果显示，SL7