携带hgf基因的减毒沙门氏菌对大鼠胃溃疡愈合及cd34表达的影响论文

《携带hgf基因的减毒沙门氏菌对大鼠胃溃疡愈合及cd34表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、携带HGF基因的减毒沙门氏菌对大鼠胃溃疡愈合及CD34表达的影响论文.freelonellatyphimurium(St)odelslyselectedouttoobservethedistributionofgreenfluorescentprotein(GFP)inthegastrictissue,thentheremainingratslydividedinto3groups(n=24):StHGFtreatmentgroup,SttreatmentgroupandNaHCO3contr

2、olgroup.Ratsofeachgroupg/LNaHCO3everyotherdayorally.HistopathologicalexaminationoftheulcertissueedbyHEstainingandtheexpressionsofCD34munohistochemicalmethodinistration.RESULTS:Onday7,gastricmucosadisappearedinulcersite,agreatofnecrotictissuecraprolif

3、eratedmorequicklyinStHGFgroupthaninother2groups(P0.01).TheexpressionofCD34proteininStHGFgrouponellatyphimuriumcarryingHGFgenecouldpromotegastricmucosarepairandneation,thusacceleratingthehealingofulcersinexperimentalrats.【Keyonellatyphimurium;stomac

4、hulcer;healing;hepatocytegroonellatyphimurium,St)是一种良好的口服DNA载体.研究发现,在体内,St可以将编码外源基因的真核质粒递呈入抗原递呈细胞(如巨噬细胞、树突状细胞等),并在其中表达及释放［1］.肝细胞生长因子(hepatocytegroinggrog/kg)腹腔内给药麻醉后固定,常规消毒大鼠腹部皮肤,上腹部正中切口长2.0cm,打开腹腔,暴露术野,微量注射器在大鼠胃窦前壁浆膜下(进针0.5mm以防止乙酸漏出)注入30μL的纯冰乙酸后依次缝合

5、腹壁各层组织.1.2.2分组、给药及病理观察建立大鼠模型77只,并随机选出5只,给予StGFP用于检测GFP在胃壁中的分布,72只大鼠随机分成3组(n=24):StHGF治疗组,St组和碳酸氢钠(NaHCO3)对照组,StHGF,StGFP和St菌株在LB培养液中37℃摇菌过夜活化并在StHGF组中加入丁胺卡那霉素50μL(StHGF对丁胺卡那霉素有抗性),次日扩大培养约16h(10mLLB液中加相应活化的菌100μL),在A525nm波长测值计算菌量,菌液离心去上清后用1×105m

6、g/LNaHCO3重悬菌体,调整细菌数为2×109cfu/mL,每只0.5mL,NaHCO3组给1×105mg/LNaHCO30.5mL,自术后第2日起隔日给药一次,直到取标本;除StGFP组5只于给药7d后全部取标本外,其余三组分别于给药后7,14,21d各8只取溃疡及周围3mm正常胃黏膜组织行40g/L甲醛固定,用圆规测量溃疡凹陷的中心,石蜡包埋时平行于胃大弯通过溃疡凹陷的中心切组织块固定;分别进行HE染色观察各期病理变化,并在光镜(×100)下用微测量尺测量胃黏膜上皮的爬行长度(以较长一

7、侧为准).1.2.3免疫组化染色兔抗大鼠CD34多克隆抗体工作液浓度分别是1∶100;常规石蜡包埋切片,厚4μm,采用SP法,免疫组化染色程序按试剂盒说明书进行;阳性对照采用自身对照,用磷酸盐缓冲液代替一抗进行阴性对照;cMet和CD34均采用高温高压抗原修复.1.2.4结果判定通过染色计算微血管密度(microvesseldensity,MVD)以判断CD34的表达水平.先用40倍光镜扫视整个切片,寻找高血管密度区,即“热点”.“热点”一般位于新生黏膜与溃疡裸区移行处及与肝粘连处,参照文献［

8、5］方法计数.统计学处理:MVD以x±s表示,组间差异比较用单因素方差分析及Bonferroni法,P0.05为有统计学意义,所有数据应用SPSS12.0软件包处理.2结果2.1大体肉眼观察给药后7d时各组呈明显凹陷性溃疡,溃疡面被覆坏死组织,浆膜侧均与肝粘连,溃疡底部组织既薄又脆,稍不慎溃疡底部被撕裂穿孔,溃疡直径1.0~1.4cm;14d时溃疡面明显红润,肉芽组织增生,少量黏膜上皮覆盖溃疡面,溃疡面皱缩;21d时溃疡面有大量黏膜上皮覆盖,正常黏膜与新生黏膜界限尚清,溃疡面明显缩小,但溃疡凹陷