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《以减毒沙门氏菌呈递的生长抑素基因疫苗免疫母鼠的生物》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、华中农业大学本科毕业论文（或设计）目录摘要I关键字：IIAbstractIIKeyword:III1前言12．材料和方法22.1材料22.1.1免疫用基因疫苗22.1.2试验用小鼠22.1.3试验用仪器22.1.4主要试剂22.1.5主要试剂的配制22.2试验方法32.2.1重组沙门氏菌中质粒的提取及鉴定32.2.2疫苗准备32.2.3试验动物免疫方法32.2.4试验动物的饲养及管理32.2.5组织样的采集和处理32.2.6基因组DNA的质量检测及内参照PCR42.2.7PCR方法的敏感性和基因
2、整合可能性的分析:43结果与分析53.1重组质粒pGM-CSF/SS的酶切鉴定53.2 PCR敏感度检测53.3 母鼠及仔鼠基因组DNA质量检测63.４ 母鼠及仔鼠基因整合检查74讨论84.1关于免疫组各组细胞基因组DNA的提取分析94.2关于PCR敏感性分析94.3关于pGM-CSF/SS基因整合的可能性分析95结论10参考文献10致谢1213华中农业大学本科毕业论文（或设计）以减毒沙门氏菌呈递的生长抑素基因疫苗免疫母鼠的生物安全性研究摘要DNA疫苗的生物安全性是其走向临床前所须解决的关键问题
3、之一。将以减毒沙门氏菌呈递的pGM-CSF/SSDNA疫苗免疫母鼠,验证其对母鼠的安全性,为临床应用提供安全性证据。将45只5周龄昆明小白鼠随机分为3组,分别用pGM-CSF/SS（A组）、减毒沙门氏菌空菌（K组）、PBS（C组）口服免疫,剂量为200μL,浓度为2×1010cfu/mL.进行免疫后,待母鼠产仔后3周提取母鼠心脏、肝脏、脾脏、肺、肾、生殖各组织DNA，提取仔鼠3、6、9周仔鼠心脏、肝脏、脾脏、肺、肾、生殖各组织DNA,利用PCR技术来检验母鼠和仔鼠各组织基因整合的可能性。结果显示
4、：pGM-CSF/SSDNA疫苗免疫母鼠后，使用引物扩增和凝胶电泳检测母仔鼠各组织基因组,其发生基因整合的频率（2.3×10-8）远远低于基因自发突变的频率（2×10-6），）。因此认为，pGM-CSF/SSDNA疫苗不会随机插入到宿主基因组中，具有较高的生物安全性。关键字：生长抑素；DNA疫苗；生物安全性；基因组整合13华中农业大学本科毕业论文（或设计）EvaluationonthebiosafetyofpGM-CSF/SSSomatostatinDaliveredbyAttenuatedSa
5、lmonellainFemale-miceAbstractThebiosafetyofDNAvaccineisoneofthekeyquestionsproblemswhichshouldbesolvedbeforeitisusedintheclinicaltrail.ToInordertostudytheEvaluationevaluateonthebiosafetyofpGM-CSF/SSsomatostatindeliveredbyattenuatedsalmonellainfemale-
6、mice,Inordertoevaluatethebiosafetywhenitisusedintheclinicaltrail.45femalemiceattheageof5weekswereselectedanddividedrandomlyinto3groups.MicewereorallyadministeredwithpGM-CSF/SSplasmid(A)、attenuatedSalmonella.(K)、andPBS(C)withthedosagesofeverygroupswer
7、e2×1010cfu/mL,200μLrespectively.After3weeksofpostpartum,totalTotalDNAsampleswereextractedandtakenformheart、liver、spleen、lung、kidneyandgonadofboththedaminfemalemicewhohadbeenimmunizedvaccinedattheendofweek3ofpostpartumandtheand3,6,9weeksoffspringatpos
8、tnatal3,6and9weeks.ofheart、liver、spleen、lung、kidneyandgonadwereextracted,TthepossibilityofintegrationofDNAvaccineplasmidsintomicegenomewasanalyzedbyPCRtechnology.Byusingprimeramplificationandgelelectrophoresisdetection,theresultsshowedthataftertheDNA
