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时间:2019-03-14
《重组减毒沙门氏菌鸭瘟病毒dna疫苗的构建及其口服免疫效果研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、分类号站。’4学号S2012352S?;?西川巧化大擎硕±学位论文重组减毒沙口巧菌鹏痘病毒DNA疫苗的构建及其口服免疫效果硏究刘雪燕指导巧肺_茹庆科巧巧巧-学科专业预防冉医学.:.研巧方向劝物微生祐与免巧学....<-―',-■-.?一;.J二.2015年5月.式'-'"'■-./.....乂',../节:;古'。,三,?,..、…?-'.产.V.一?-4.?■?-^—*?
2、.I;."S、1*'..i.,I'.(..论文独创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知,,除了文中特别加1^标注和致谢的地方外学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四川农业大学或其它教巧机一构的学位或证书所使用过的材料。与我同王作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名;i年月1如;&扣j关于论文使用授巧的声明本人完全了解四川化业乂学有关保留、使用
3、学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家巧レ关部口或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被巧阅和借阅,可ッ采用影巧、缩印或扫描巧复制手段保存、汇编学巧论文。同意四川化业火学可不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内巧。,在本论文不保密。□本论文保密__年解密巧适本授权。上□""(请化W内划V)'研究生签名;年6月主日(:年导师签名卢((月y日%>、4摘要VAX-本论文W质粒pl和pGL3control为基础,辅W重要元件CG免疫基序、核(p一禪向序列、基因等,利用类生物学合成方法构建出种新
4、颖的通用型DNA疫苗)kDNA-。C0S7细胞证实载体,命名为p酶切连接绿色巧光蛋白基因(姆巧体外转染该质粒具有pVAXl相似的真核表达能为。选取鸭痘病毒gB糖蛋白膜外区域编码基因基因和鸭正-和UL24基因为抗原基因,大厥杆菌不耐热肠毒素B亚单位Eco/fLTB2()mRNA反转录cDNA为分子佐剂构建多种鸭瘋病毒DNA疫苗质粒。WC8276■-成kr鼠伤寒沙口氏菌UKlAoiAc缺失巧为口服兔疫途径递送活菌载体,20日龄(^>w麻鸭口服免疫重组减毒沙口氏菌鸭適病毒DNA疫苗两次,均能产生较高的体液及粘一AC/kDN
5、A-膜免疫应答,并在定程度上抵抗鸭瘋病强毒株的挑战,其中C8276a巧巧(pUL24-LTB御效果显著。结果如下:一种新颖通用型DNA疫苗载体的构建:利用类生物学合成方法合成全新DNAkDNA--疫苗载体p:WUK1基因组、pVAXl和pGL3control为模板PCR扩増获得基因片段〇?/、pUC、CMVMCS、SGHpoly(A)、SV40enhancer和SV40latepoly(A)片段;重叠PCR两两敲合构建H模块片段:(1/2DTSII+W如CpG+PUC)、(BGHpolyA+CpG+SV40e
6、nh抑cer和MVMCS+CpG+SV40p〇lyA+l/2DTS巧;最后利用G化son)(Assembly?MasterMix(NewEnglandBiol油s?inc.)完成pkDNA质粒的类生物合成。两次测序结果表明与理论序列相符,酶切连接绿色巧光蛋白基因(巧汝),直接巧光法可见绿色炎光蛋白在COS-7细胞中很好的表达,其真核表达能力与pVAXl相似。B45-鸭媪病春DNA疫苗的构建及其体外表达能力检测;PC民扩増tg11650b、(p)--UL24-、LTB、和鸭正2基因PC艮扩増得到UL24LTB、UL2
7、4DU正2融合片。;重叠段DNADNA-单抗原基因及誕合基因酶切连接pk,完成鸭瘋病毒疫苗质粒;pkDNAtgB、----DNAUL24kDNAUL24、kDAN-Du2。pk、pLTBpUL24IL,测序鉴定无误所有DNA-7细胞疫苗质粒瞬时转染COS,间接免疫巧光检测转染24小时后的细胞,均可见强烈的绿色巧光信号,而空质粒转染组及空白组巧光不明显;48小时后,收集细胞,----提取总RNAPC民检DNALTBA-DuL2,民T测可见pkUL24和pkDNUL24I转染组中佐剂基因特异性转录。c8276Ac#p/巧
8、a弱毒株及重组减毒沙口氏菌鸭痘病毒DNA疫苗菌株的构建鼠iUK-lAA伤寒沙口氏菌c8276(w却c巧缺失株为亲
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