减毒沙门氏菌载体及其在疫苗研究中的应用进展

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1、文章缁号：1002-2694(2008)05-0478-03减毒沙门氏菌载体及其在疫苗研究中的应用进展黄小波，曹三杰，文心田，杨恒中图分类号:R378.2文献标识码：A沙门氏菌是一种非常亀要的人兽共患细菌病•主要引起人和动物的肠炎、败血症等.减毒沙门氏菌是通过物理、化学或基因工程等方法•使沙门氏菌某些轄定的基因发生不可逆的突变•使其毒力大大降低•感染宿主细胞后可在体内生长繁殖⑴.沙门氏菌長一种侵袭性胞内菌•可用其作为疫苗载体携带原核表达质粒和真核表达质粒，庫组减毒沙门氏菌疫苗制备简单，免疫方便，有较

2、强的免疫原性•能诱导持久的免疫反应•尤其可诱导较强的黏膜免疫反应⑴.减毒沙门氏菌载体由于其特殊的优点而被广泛应用于疫苗研究并取得了很大进展.1减毒沙门氏菌戟体概述1.1减毒沙门氏菌的侵入机制研究表明减毒沙门氏菌在肠道的侵入机制主要包括上皮细胞途径和非上皮细胞途径两种.1.1.1上皮细胞途径是以M细胞为代表的上皮细胞途径•具有侵袭力的沙门氏菌采用这个途径侵入细胞.动物肠道黏膜表面派伊尔氏结（Peyer'spatches.PP）的滤泡上皮细胞中分布着稀疏的微皱褚细胞（microfoldcell,M细胞〉

3、.被肠上皮细胞紧紧包围•在胃肠道增殖的具有侵袭力的沙门氏菌可以侵袭M细胞并破坏M细胞进入皮下组织⑶，也可通过包围M细胞的具有吸收能力的上皮细胞进入皮下组织，然后可被位于上皮下穹隆区（SED）的抗原递呈细胞（APCs）所捕获，树突状细胞（dendriticcell,DC）被认为是早期吞噬沙门氏菌的主要细胞。1.1.2非上皮细胞途径缺乏侵袭力的沙门氏菌可通过被吞噬细胞直接吞噬而侵入机体，再被运送至淋巴器官⑷。Rescigno等发现⑸缺乏侵袭力的沙门氏菌通过DC打开紧密连接的肠上皮细胞•从上皮细胞的空隙伸

4、出的树突而直接被吞噬，随后DC又分泌多种连接蛋白来保持上皮细胞屏障的完整性。沙门氏菌侵入M细胞和上皮细胞依赖于沙门氏菌致病岛（SalmonellaPathogenicityIsland1,SPI1）的侵入基因⑷•而缺乏SPI1的沙门氏菌却不能侵入M细胞，只有依靠CD*分泌的吞噬细胞宜接吞噬后运送到血液中•继而到达肝脏和脾脏，能激发体液免疫抗体IgG，却不能诱导的黏膜免疫IgA抗体，因此与上皮细胞途径免疫不同。1.2减毒沙门氏菌传递疫苗的免疫应答机制研究表明携带质粒DNA的滅毒沙门氏菌被巨噬细胞、树突

5、状细胞等细胞吞噬后，这些吞噬细胞被激活活化，开始分化并向脾脏和淋巴结等组织迁移•在此期间滅毎沙门氏菌死亡•裂解释放其携带的真核质粒，真核质粒经过“待定转运”和“渗漏”进入吞噬细胞的细胞质•再进入细胞核转录后于细胞质表达外源抗原⑹・Fujita等⑴发现单核巨噬细胞、B细胞、树突状细胞、内皮细胞可将胞吞的目的抗原加工成短肽并与其表达的MHC-n类产物结合.在各种细胞因子的协助下最后被CD；T细胞识别并结合.从而剌激CDZT细胞分泌调节产生细胞和体液免疫.Spreng等⑹等证明减髯沙门氏菌进入有核细胞内能

6、表达自身及携带的外来抗原•并将胞内的蛋白誨体消化成肽类后.与MHC-1类分子结合递呈在细胞膜表面•最终被CD；T细胞识别并结合.从而发挥细胞毒作用.Paglia等⑹认为是沙门氏菌诱导吞噬细胞的凋亡•携带的编码基因随吞噬细胞的溶解而向DCs传导.Yrlid等通过体外实验中发现重组减毒沙门氏曲14028感染可诱导源巨噬细胞凋亡，游离的异源抗原或死细胞被其他抗原递呈细胞如巨噬细胞和DCs所摄取•激活辅助细胞.淋巴细胞在DNA疫苗免疫中还具有相互“交史提呈”抗原和“交叉激活”免疫的作用.1.3减毒沙门氏菌载

7、体递呈疫苗的优点滅瘴沙门氏菌作为疫苗载体有很多特殊的优点，（1）减瘴沙门氏菌既可携带原核表达质粒也可携带真核表达质粒c,,）»（2）重组滅毒沙门氏菌疫苗生产工艺简单•疫苗易于储存和运输•因此疫苗的成本相对较低;（3）«组减毒菌疫苗可经口服免疫、鼻内免疫和直肠免疫等多种途径免疫•非常方便；（4）疫苗可被直接递呈到APC细胞•运送效率高•能有效激发细胞免疫和体港免疫，而DNA疫苗采用肌肉注射和基因枪皮下轰击仅能递呈到有限的抗原递呈细胞；（5）减奉沙门氏菌具有免疫佐剂作用，研究最多的是沙门氏菌的脂多糖（L

8、PS）・LPS的剌澈可以增强DCs捕获和加工MHC-I类抗原的能力.有利于将重组沙门氏菌的抗原呈递给待异性的B、T细胞；（6）免疫具有持续性•以减毒沙门氏菌为载体表达的外源蛋白对宿主持续剌激，不需要反复加强免疫。1.4滅毒沙门氏菌载体潜在的问题减毒沙门氏菌作为疫苗载体存在一些潜在的问题：（1）减毒沙门氏菌将异源质粒DNA递送给宿主细胞，尤其是进入分化活跃的淋巴细胞•很可能与宿主的基因组发生整合•使原癌基因和抑癌基因的表达失控而导致体细胞癌变；（2）重组减毒的沙门氏菌是