mir-503调控破骨细胞分化及其在绝经后骨质疏松症中作用机制

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1、中图分类号UDC博士学位论文学校代码!Q5兰3MiR-503调控破骨细胞分化及其在绝经后骨质疏松症中作用机制TheeffectofmiR-503Oilregulatingthedifferentiationofosteoclastandthusmodulatingpostmenopausalosteoporosis作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期扣l弓．FJ3谢亘青l临床医学内科学湘雅二医院罗湘杭教授答辩委员会主中南大学2013年5月原创性声明f㈣㈣㈣㈣棚删Y24232

2、21本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：监日期．生年』月笠日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文

3、的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：葺曼茎导师签名冱≥亟日期：主生年三月塑日中文摘要第一部分绝经后骨质疏松症患者破骨前体细胞microRNA表达谱改变目的：分离纯化绝经后骨质疏松症患者和绝经后骨量正常妇女的CDl4+外周血单核细胞(PeripheralBloodMononuclearCells，PBMCs)，研究绝经后骨质疏松症患者PBMCsmicroRNA表达谱

4、的变化。方法：招募相互匹配的51例绝经后中国女性，其中26人确诊为绝经后骨质疏松症，25例骨量正常。从上述相互匹配的两组人群中各随机抽取5名对象，以密度梯度离心法分离外周血单核细胞，用免疫磁珠法分选出高纯度的CDl4+外周血单核细胞(PBMCs)；应用microRNA微阵列技术，对比绝经后骨质疏松症组和骨量正常的绝经后女性的外周血单核细胞miRNA表达谱的变化。选取表达显著下调的miR-503作为进一步研究的对象。通过实时定量PCR(quantitativereversetranscriptionPCR，

5、qRT-PCR)方法验证MiR-503在所有51名对象PBMCs中的表达情况。结果：(1)26名符合绝经后骨质疏松症诊断标准，25名相应年龄段的绝经后女性的骨密度正常。两组人群在年龄、体重、血液雌二醇水平方等面均匹配，并且两组人群在饮食钙摄入量、绝经年限、体育锻炼、血清完整的甲状腺激素(parathyroidhormone，PTH)水平、血清25．羟维生素D、血清肿瘤坏死因子0L(Tumornecrosisfactor伐，TNF．0【)等水平均无明显差异。骨源性碱性磷酸酶(bone．formationII

6、markerbone．specificalkalinephosphatase，BAP)在绝经后骨质疏松症患者中减低(P

7、hsa-miR一218，hsa-miR-618表达下调，而hsa．miR-133a，hsa．miR-107表达上调，以hsa-miR．503表达下调最为明显。(4)通过PCR验证miR-503在所有的51名对象中均有表达，且表达模式与miRNA微阵列吻合，即在绝经后骨质疏松症组表达水平明显低于骨量正常的绝经后女性组。结论：应用microRNA芯片发现绝经后骨质疏松症患者CDl4+PBMCs中micorRNA表达谱的差异，在骨质疏松症患者中Hsa-miR-503，hsa—miR-218，hsa．miR．61

8、8表达下调，而hsa-miR-133a，hsa-miR-107表达上调，其中hsa．miR-503表达下调最为明显。qRT-PCR进一步发现在所有绝经后骨质疏松症人群中均有miR-503表达下调。关键词：绝经后骨质疏松症，CDl4+单核细胞，microRNA，miRNA微阵列技术III第二部分mil0503调控破骨细胞分化及其对去卵巢小鼠骨代谢的影响目的：从细胞水平研究hsa-miR-503在CDl4+PBMCs向破骨细胞分化