mir-148a调控破骨细胞分化及其在sle患者骨量异常中的作用机制

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1、万方数据中图分类号UDCR58610博士学位论文学校代码!Q§33密级坌珏miR一148a调控破骨细胞分化及其在SLE患者骨量异常中的作用机制TheeffectofmiR—-148aonregulatingosteoclastdifferentiationandabnormalbonemassofpatientswithsystemiclupuserythematosus作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期!!?：p?矽陈超内科学内分泌与代谢病湘雅二医院罗湘杭教授答辩委员会中南大学二。一四年五月万方数据原创性声明rillIIII

2、IIrllIIIIIIY2688368本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：燃日期：旦年尘月■日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以

3、采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：越导师签名隧堕日期：坐年』月旦日／1万方数据miR-148a调控破骨细胞分化及其在SLE患者骨量异常中的作用机制摘要第一部分初发系统性红斑狼疮(SLE)患者破骨前体细胞hsa．miR-148a表达水平和意义目的：分离纯化初发SLE患者和正常对照组的CDl4+Pl-周血单核细胞(PeripheralBloodMononuclearCells，PBMCs)，研究SLE患者CDl4+PBMCshsa．miR-1

4、48a表达改变。探讨hsa．miR-148a表达与初发SLE患者骨量异常的关系。方法：招募相互匹配的31例中国青年女性，其中16人为未接受过糖皮质激素治疗的初发SLE患者，15例为正常对照组。用密度梯度离心法分离两组人群的外周血单核细胞，然后用免疫磁珠法分选高纯度的CDl4+PBMCs，并通过实时定量PCR(real．timequantitativePCR，qRT-PCR)法检测hsa-miR-148a在两组人群CD14+PBMCs中的表达情况。在上述两组人群的CDl4+PBMCs使用重组人巨噬细胞集落刺激因子(recombinanthuman．macroph

5、agecolonystimulatingfactor,rh．MCSF)和人核因子1(B受体活化素配体(humanreceptoractivatorofnuclearfactor-r,Bligand，hRANKL)诱导其向破骨细胞分化，行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistantacidphosphatase，TRAP)染色、TRAP活性测定及实时定量PCR法检测破骨细胞分化指标TRAP／活化T细胞核因子cl(nuclearfactorofactivatedTcellscl，NFATcl)mRNA水平观察两组破骨细胞的分化成熟情况。将anti．miR

6、-148a转染SLE患者的CDl4+PBMCs，转染后加入rh．MCSF和hRANKL诱导破骨细胞分化培养，行TRAP染色、TRAP活性测定及实时定量PCR法检万方数据测TRAP／NFATc1mRNA水平观察破骨细胞的分化成熟情况。结果：(1)初发SLE患者的骨密度明显低于正常对照组，而初发SLE患者CDl4+PBMCs中的hsa-miR-148a表达水平明显高于正常对照组。(2)与正常对照组相比，SLE患者组TRAP+多核巨细胞数量增加，TRAP活性增强，TRAP／NFATclmRNA水平升高。(3)将anti．miR-148a转染SLE患者的CDl4+PB

7、MCs，可抑制TRAP+多核巨细胞形成，TRAP活性减弱，TRAP／NFATclmRNA水平下降。结论：初发SLE患者CDl4+PBMCs中的hsa-miR-148a表达明显升高，导致其破骨活性增强，骨量降低。表1个，图4幅，参考文献80篇关键词：系统性红斑狼疮；hsa．miR-148a；骨密度III万方数据第二部分rain．miR-148a对去卵巢小鼠骨代谢的影响目的：综合骨密度检测、Micro．CT分析、骨组织形态计量学分析、成破骨相关因子mRNA表达水平检测、血清骨转换生化指标检测评价mmu—miR-148a对小鼠骨代谢的影响。方法：将36只6周龄雌性C

8、57BL／6小鼠随机分为6组：去卵巢(