cpg基序甲基化状态及其调控因素在sle发病机制中的作用分析

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1、优秀毕业论文复旦大学博士研究生毕业论文中文摘要第一部分SLE患者与正常人cpG基序甲基化状态与DNMT的表达目的研究系统性红斑狼疮患者(SLE)CpG基序甲基化状态和DNA甲基转移酶(DNMT)的mRNA表达水平，并探讨两者的关系。方法分离38例SLE患者与19例正常人外周血淋巴细胞，分别用5一甲基胞嚓陡抗体与流式细胞仪检测CPG基序甲基化水平和逆转录一聚合酶链反应(RT-PcR)分析DNMTI、DNMT3A、DNMT3B的m胭A表达水平。结果活动期SLE患者的CpG基序甲基化水平(8.08士1.70)低于正常对照组(11.61土1.20，P<

2、0.01)与缓解期SLE患者(10.9社1.46，P<0.05)，正常人与缓解期SLE患者的CpG基序甲基化水平相比，差异无统计学意义(P>0.05)。SLE患者的CpG基序甲基化水平与SLE一DAI成负相关(r=一0.79，P<0.05)。活动期SLE患者(0.421士0.178)与缓解期SLE患者(0.516士0.162)的DNMTI表达水平均低于正常对照组(0.781士0.192，P<0.05)。活动期、缓解期SLE患者DNMTI的表达水平相比，无明显统计学意义(P>0.05)。活动期(0.698士0.183)、缓解期(0.760士0.1

3、75)SLE患者及正常人(0.724士0.158)的DNMT3A表达水平相比，差异无统计学意义(P>0.05)。DNMT3B的表达水平极低。活动期与缓解期SLE患者DNMTI的表达水平与SLE一DAI的相关性不明显(r=一0.23，P>0.05)。SLE患者CpG基序甲基化水平与DNMTI的表达水平相关性不明显(r=0.28，P>0.05)。结论SLE患者CpG基序甲基化水平的下降在SLE发病机制中具有重要作用。DNMTI表达水平的下降在SLE发病机制中可能起重要作用，但不是决定SLE患者CpG基序甲基化状态的惟一因素。关键词红斑狼疮，系统性;

4、CpG基序甲基化;DNA甲基转移酶;表观遗传学中图分类号:R75第二部分内外因素对CpG基序甲基化状态与DNMTI表达的影响目的探讨5一氮杂胞普、雌二醇及紫外线(254nm)对SLE患者与正常人cpG基序甲基化状态与DNMTI表达的影响。方法分离12例SLE患者与11例正常人外周血淋巴细胞，经PHA刺激1天后，分为未处理组、5一氮杂胞昔组、雌二醇组、紫外线组，继续培养3天后分别用5一甲基胞嚓陡抗体与流式细胞仪检测CpG基序甲基化水平和实时定量逆转录一聚合酶链反应(realtimeRl斗PCR)分析DNMTI的mRNA表达水平。结果与非处理组相比

5、，5一氮杂胞营组SLE患者与正常人的CpG基序甲基化水平均下降(p<0.1)，DNMTI表达水平的下降无统计力精品参考文献资料优秀毕业论文复旦大学博士研究生毕业论文学意义(p>0.05);雌二醇组、紫外线组SLE患者与正常人的CpG基序甲基化水平与DNMTI的mRNA表达水平的差异均无统计学意义(p>0.05)。结论5一氮杂胞普可抑制CpG基序甲基化状态，其抑制作用的产生与DNMTI表达水平的下降无明显相关性。雌二醇与紫外线(254nm)对CpG基序甲基化状态与DNMTI的表达水平的影响无统计学意义。关键词红斑狼疮，系统性;CpG基序甲基化;D

6、NA甲基转移酶;5一氮杂胞营;雌二醇;紫外线中图分类号:R75第三部分甲基cpG结合域蛋白的构建、表达、鉴定目的在大肠杆菌中表达甲基CpG结合域四聚体蛋白，并对其进行纯化和鉴定。方法将重组表达质粒4xMBD一pET30b+转化大肠杆菌DH5a克隆扩增并测序鉴定后，转化大肠杆菌BL21(DE3)后接种于LB培养基中，异丙基硫代半乳糖昔(IPTG)诱导重组蛋白的表达，表达产物经Ni一TA亲和纯化，通过SDS一PAGE和Westemblotting鉴定蛋白表达。结果克隆质粒测序结果与理论预期完全一致，SDS一PAGE显示在大肠杆菌中表达出分子量为46

7、000的目标蛋白，矶范Stemblotting显示目标蛋白带有His融合标签(氨基端)和HA标签(梭基端)。结论成功表达、纯化了甲基CpG结合域四聚体蛋白，为今后进一步研究DNA甲基化及其调控因素奠定了基础。关键词CpG基序甲基化;甲基CpG结合域;原核表达;蛋白纯化中图分类号:R75精品参考文献资料优秀毕业论文复旦大学博士研究生毕业论文Abstr8CtPart1MethylationofCPGmotifsandexPressionofDNAMethyltransferaseinthePatientswithsystemieluPuseryth

8、ematosusandnormaleontrolsObjeetiveTostudymet勿lationofCPGmotifsandexPression