铁蓄积在绝经后骨质疏松症（ⅰ型）中作用机制的相关研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY论文题目研究生姓名指导教师姓名徐又佳（教授)专业名称外科学（骨外）研究方向铁代谢与骨质疏松症论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名:期：>，x

2、•K苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在_____年_月解密后适用

3、本规定。非涉密论文0论文作者签名：如忒日期:“铁蓄积”在绝经后骨质疏松症（Ⅰ型）中作用机制的相关研究中文摘要“铁蓄积”在绝经后骨质疏松症（Ⅰ型）中作用机制的相关研究中文摘要第一部分“铁蓄积”对去势前后小鼠骨代谢的影响及相关机制目的：观察雌激素的有无对铁蓄积小鼠骨量、骨转换指标及氧化应激的影响。方法：建立高铁小鼠模型，将小鼠随机分为对照组（con组）、高铁组（F组）、去势组（OVX组）、高铁去势组（F+OVX组）。con组及OVX组注射生理盐水，余两组注射枸橼酸铁胺（FAC），8周后检测小鼠体重，对肝脏及股骨远

4、端行普鲁士蓝铁染色，ELISA检测血清Fer、ALP、osteocalcin、CTX、TRAP-5b、MDA、SOD；股骨远端Micro-CT三维分析，提取各组小鼠股骨骨髓细胞进行破骨细胞培养，抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞分化。结果：各组小鼠体重无明显差异。F组及F+OVX组血清铁蛋白含量明显升高（P<0.05），且肝脏及股骨远端铁染色着色明显。ELISA结果示：未去势（雌激素存在）的F组与con组相比，CTX、TRAP-5b、MDA、SOD组间无明显统计学差异（P均>0.05），F组ALP及osteo

5、calcin表达量较con组明显降低（P均<0.05）；而去势的两组相比，铁剂干预后，MDA、TRAP-5b、CTX明显升高（P均>0.05），SOD、ALP、osteocalcin则降低（P均>0.05）。Micro-CT分析表明：雌激素存在时，对照组与铁干预组骨密度及相关指标无明显差异（P>0.05）；雌激素缺乏时，与OVX组比较，F+OVX组骨量下降更为严重（P<0.05）。TRAP染色显示去势前各组小鼠破骨细胞数无明显差异（P>0.05）；而去势后，F+OVX组破骨细胞数明显高于OVX组（P<0.05

6、）。结论：未去势时（有雌激素），FAC对骨量、骨吸收影响甚微；去势后（无雌激素），FAC能显著增强破骨活性，使骨量下降。雌激素与铁对骨代谢的该种拮抗作用与骨形成无关，而仅与骨吸收相关。关键词：铁蓄积；雌激素；氧化应激；去卵巢I中文摘要“铁蓄积”在绝经后骨质疏松症（Ⅰ型）中作用机制的相关研究第二部分铁与雌二醇的联合作用对成骨细胞、破骨细胞生物活性的影响及相关机制目的：研究成骨细胞、破骨细胞在铁与雌二醇的共同干预下，各自生物活性指标变化，并探讨NF-κB通路在其中的作用。方法：1、成骨细胞选取小鼠颅骨原代细胞，分

7、为对照组，FAC组、E2组、FAC+E2组，各组用相应的10μM枸橼酸铁胺（FAC）及10nM雌二醇（E2）干预，3d后行碱性磷酸酶（ALP）染色，10d后取培养基上清检测ALP活性；荧光定量PCR（q-PCR）检测成骨相关基因差异。2、破骨细胞选取细胞系RAW264.7，分组同成骨细胞，以50μMFAC及10nME2干预，TRAP染色及噬骨陷窝实验检测破骨细胞分化差异，q-PCR检测破骨相关基因差异；荧光酶标仪检测成骨细胞及破骨细胞活性氧水平。提取破骨细胞胞浆及胞核蛋白，Western-Blot检测NF-κ

8、B通路相关蛋白表达量的差异。结果：1、成骨细胞ALP检测结果示，无论有无雌二醇，FAC均能抑制成骨细胞ALP活性，基因水平上，FAC显著下调SP7、Runx2基因表达水平（P均<0.05），该下调作用与雌激素无关。2、破骨细胞TRAP染色结果示：FAC能显著增加TRAP染色阳性细胞数（P<0.05），而当雌二醇存在时，该作用被抑制。噬骨陷窝实验结果与之一致。q-PCR结果：无雌二醇干预时，铁剂能显著