棘白菌素b及其母核的分离纯化工艺研究

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1、上海师范大学硕士学位论文摘要真菌感染疾病，尤其是深部真菌感染疾病的发病率和致死率逐年增加，因此抗真菌药物的研发将会成为人类面临的一个难题。棘白菌素类药物是20世纪70年代发现的一组天然产物，由相似的环状多肽核心和不同的腊肪酸侧链组成，通过非竞争性作用抑制细胞壁中B．(1，3)一D一葡聚糖的合成，而发挥其抗真菌作用。具有作用机制独特，不良反应率低，且对一些唑类和两性霉素B耐药的真菌具有很强的抗菌活性等特点。目前已经上市的棘白菌素类药物有三种，分别是卡泊芬净(caspofungin)、米卡芬净(micamlgin)和阿尼芬净(an

2、idulafungin)。其中阿尼芬净作为第三代棘白菌素类的半合成抗真菌药，2006年12月在美国首次上市。与其他棘白菌素类抗真菌药相比，阿尼芬净具有更大的分布容积和更广谱的抗菌活性。阿尼芬净是由棘自菌素B(EchinocandinB，ECB)通过微生物转化切除脂肪酸侧链，得到棘白菌素B母核(EchinocandinBNucleus，ECBN)后，再通过化学合成的方法加上新的侧链而制得。ECB和ECBN作为制备阿尼芬净的两个最重要的中间产物，其分离纯化工艺一直是制备该药物的关键。通过对ECB的初提、色素的去除、纯化、精制方面的

3、研究，确立了一条完整可行的ECB分离纯化工艺。先向ECB菌丝体中加入2倍菌丝体体积的60％乙醇溶液，pH调至4．0，超声浸提3小时后将浸提液过滤，重复上述步骤浸提第二次；再通过阳离子交换树脂FPCI1Na对ECB浸提液中的色素进行去除，确立最佳上柱oH为5，上柱流速为5mL／min：然后利用大孔吸附树脂SP825进行纯化，上柱液pH调至5，以4mL／min的流速上柱，2倍柱体积20％乙醇水溶液除强极性杂质和部分色素，70％乙醇水溶液解吸；最后用NMl00树脂精制，以pH5．0，流速3mL／min上柱，30％乙醇水溶液除强杂和色

4、素，80％乙醇解吸，最终ECB的HPLC纯度在93％，得到产物的收率为50％。同时对ECBN的分离纯化工艺进行了研究，先确定ECBN在pH4．5下最稳定；再用大孔吸附树脂XAD一18对ECBN进行第一次柱分离，上柱pH为4．5，流速为3mL／min，2倍柱体积的pH4．5水除强极性杂质和盐，17％甲醇水溶液(pH4．5)进行解吸；最后用亲水性C18填料进行精制，自然流速上柱，pH4．5水除极性杂质和盐，直到ECBN有少量泄漏后改用3％甲醇水溶液(pH4．5)解吸，最终ECBN的纯度为97％，得到产物的收率为65％。最后，利用L

5、C．MS对分离后的ECBN进行了质量分析。关键词：棘球白素B，棘球白素B母核，分离纯化，大孑L吸附树脂，亲水性摘要上海师范大学硕士学位论文C18填料上海师范大学硕士学位论文AbstractAbstractIIlllllllllllllIIIIIII『Y2525573WiththesituationthatmorbidityandmortalityrateofdiseaseswhichareinfectedbyFungi，especiallybyinvasivefungalhasincreasedinrecentyears，th

6、eR&Dofanti—fungaldrugsnowhasbecomeahotareaofresearch．Asanti—fungaldrugs，Echinocandinsareaclassofcyclichexapeptideshavingsomedifferentlipidsidechainsmodifications，whichwasfoundinthe1970s．Theyinhibitthesynthesisofp一(1，3)-D—glucaninthecellwallnoncompetitively．Theyhavea

7、novelmechanism，alowadversereactionrateandastrongantibacterialactivityforsomeazolesandamphotericinBresistantfungi．Atpresent，therearethreesuchdrugsincludingcaspofungin，micafunginandanidulafungin．Anidulafunginisthethirdgenerationofechinocandinsemi—syntheticantifungaldr

8、ugs，whichwasapprovedforuseintheUnitedStatesin2006．Comparedwithotherantifungalagents，anidulafunginhasagreatervolumeofdistributionandamorebr