mir-150抑制肝星状细胞lx-2激活的机制研究

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1、温州医学院硕士学位论文论文题目：堡i基二!墨Q控盔』赶星丛细胞!=墨二2邀适笪扭剑婴究答辩委员会主席：蓥俊婴究旦虫国瘥痘亟随控剑虫!坠答辩委员会成员：奎握至教援虫国瘥疸亟随控剑生!坠周迭亟教援湿划医堂暄捡生堂暄奎自田教援湿必医堂院随属筮三医院塑瞳登塾援湿丛医堂瞳捡生堂陵温州医学院硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44独创性申明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45温州医学院硕士学位论文m

3、iR．150抑制肝星状细胞LX一2激活的机制研究中文摘要中文捅要研究背景微小RNAs(microRNAs，miRNAs)通过与靶基因的3’非翻译区(Untranslatedregion，UTR)以碱基互补配对的方式控制基因的转录和翻译进程。近来，越来越多的文献证实微小RNAs与肝纤维化进程密切相关。有报道显示miR．150可以通过抑制其己知靶点C．myb的表达进而抑制肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSCs)的激活及减少细胞外基质蛋白如I型胶原的产生。然而，我们发现减少的C—myb表达并不能一一对应由miR-150引起的所有现

4、象。我们推测miR-150对HSCs的抑制可能存在其它潜在的分子机制。目的本研究通过构建TGF．131诱导人肝星状细胞LX．2激活的体外模型，观测肝纤维化相关的目的miRNA，01]miR一150的表达改变；并进一步确证其与TGF一131束1]激是否存在浓度和时间依赖性。恢复LX一2中miR一150浓度对LX．2是否存在抑制以及细胞外基质的表达改变情况，并最终探讨miR-150抑铝I]TGF．13t激活的LX．2的分子机制。方法1．研究模型：采用不同I拘TGF·pl浓度(0ng／ml，O．1ng／ml，0．5ng／ml和2ng／m1)刺激LX．2，

5、并检测Col1A1的含量确证肝纤维化体外研究模型的建立。2．miR．150的确证：采用real—timePCR法检测不同时间(Oh，24h，48h矛H72h)和不同浓度(0ng／ml，0．1ng／ml，0．5ng／ml并H2ng／m1)TGF一131瘪IJ激下miR-150表达含量的改变。3．过表达的miR．150对LX．2的影响：分别采用MTT法、ELISA细胞凋亡检测试剂盒检钡OmiR一150模拟物(miR一150mimics)转染后的LX一2细胞的增殖活力和细胞凋亡率；同时，采用real—timePCR矛Hwestemblot法检测细胞外基质

6、相关蛋白I型胶原和cc—SMA的mRNA及蛋白表达改变。4．使用TargetScanHumanRelease6．2软件预测miR一150的靶基因，并采用荧光素报告基团实验确证。温州医学院硕士学位论文结果1．体外模型的建立：0ng／ml，O．1ng／ml，O．5ng／ml齐12ng／ml不同TGF-pI浓度刺激下LX一2的CollAl含量成剂量依赖性增加(P

7、24h、48h矛172h时，miR．150表达含量呈现为时间依赖性下调(尸<0．05)。3．过表达miR-150的影响：随着miR．150含量的恢复，LX一2细胞中I型胶原和Q．SMA的mRNA及蛋白明显下降(P<0．05)；与对照组相比，miR．150过表达组的增殖率明显受到抑制，仅为62．1％(P<0．05)，但凋亡率却无任何改变(P>O．05)。4．利用TargetScan发现miR—150种子序列与C014A4和SplmRNA的3’UTR区可以互补配对，且物种间的保守性较高；构建含待测靶基I因C014A4或Spl的报告质粒后，与对照组相比，

8、转染miR．150前体组中荧光素活性均明显下调(P<0．05)。同时，构建含C014A4或Spl突变序列的报告质粒，与对照