硫酸酯酶基因及其n端活性片段抑制肝星状细胞激活的作用机制研究

《硫酸酯酶基因及其n端活性片段抑制肝星状细胞激活的作用机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第二军医大学硕士掌位论文硫酸酯酶基因及其N端活性片段抑制肝星状细胞激活的作用机制研究TheeffectsandmechanismofSulfatase--1geneanditsN··terminalactivefragmentininhibitingtheactivationofhepaticstellatecells硕士生：曾涌导师：苏长青教授专业名称：肿瘤学培养单位：第二军医大学东方肝胆外科医院答辩日期：2014年5月二O一四年五月独创性声明本人声明：该论文是在本人导师指导下，我个人独立完成的。除论文中特别加以标注的

2、地方外，论文中不包含他人已经发表过的研究成果。其他本实验室的同志在本人科研期间提供的帮助及贡献均在致谢部分作出了说明，并表示感谢。本人承担此独创性声明的法律责任。学位论文作者签名：＼守刁乱日期：为，￥年土月扣日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容输入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描的复制手段保存、汇编学位论文。学位做作者龇＼pEt

3、期：为·U年i月≥o日导师签名：日期：洲‰坌B◇日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1．Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-4一缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一7．前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9-9-月IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第一部分大鼠原代肝星状细胞激活过程中Sulf-1基因表达的变化⋯⋯．10．一、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、一10．(一)实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．(二)主要的实验器材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．(三)主要的实验试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12．(四)主要试剂的配制方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．14．(五)主要实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15．二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15．(一)原代肝星状细胞的分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15．(二)细胞培养方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16．(三)WesternBlot检测原代肝星状细胞激活过程中0c．SMA、GFAP、Desmin、F4／80的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16．(四)RT-PCR检测原代肝星状细胞激活过程中Sulf-1基因表达水平的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19．三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．四、实验讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23．(一)原代肝星状细胞的分离方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22．(二)

6、原代肝星状细胞的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25．(三)肝星状细胞激活过程中Sulf-1基因的表达水平下降⋯⋯⋯⋯一25．第二部分重组TGF-p1因子对肝星状细胞系LX．2和HSC—T6增殖能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27．第三部分肝星状细胞系中的hSulf-1基因表达的干预⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。32一(一)hSulf-1基因腺病毒载体Ad5．hSulfl及其N端活性片段质粒载体pDC315-NSulfl的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-34-(二)Ad5．hSulfl、hSu

7、lfl．shRNA干预肝星状细胞系LX．2⋯⋯⋯⋯⋯．36．第四部分腺病毒介导的hSulf-1基因高表达对肝星状细胞系LX．2和HSC．T6激活的抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43．(一)Ad5．hSulfl和hSulfl．shRNA对肝星状细胞激活过程中肝纤维化相关的效应指标的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47．(二)pDC315．NSulfl对肝星状细胞激活过程中肝纤维化相关的效应指标的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47．全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．58．综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．65．致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．77．硫酸酯酶基因及其N端活性片段抑制肝星状细胞激活的作用机制研究摘要【研究背景与研究目的】肝纤维化