IL-18与poly I_C激活的NK细胞对肝星状细胞的杀伤作用及机制的研究

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1、分类号：R392单位代码：10183研究生学号：2014732004密级：公开吉林大学硕士学位论文（学术学位）IL-18与polyI:C激活的NK细胞对肝星状细胞的杀伤作用及机制的研究CytotoxicityofIL-18andpolyI:C-activatedNKcellsonhepaticstellatecellsanditsmechanism作者姓名：李天阳专业：细胞生物学研究方向：免疫学指导教师：苏立山教授培养单位：白求恩第一医院2018年5月IL-18与polyI:C激活的NK细胞对肝星状细胞

2、的杀伤作用及机制的研究CytotoxicityofIL-18andpolyI:C-activatedNKcellsonhepaticstellatecellsanditsmechanism作者姓名：李天阳专业名称：细胞生物学指导教师：苏立山教授学位类别：理学硕士答辩日期：ϮϬϭϴ年ϲ月ϯ日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此

3、。否则。限），应承担侵权的法律责任吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：曰期：年６月曰｜中文摘要IL-18与polyI:C激活的NK细胞对肝星状细胞的杀伤作用及机制的研究背景：多种原

4、因导致的持续性肝损伤使瘢痕组织逐渐替代正常肝小叶结构，引发肝脏的纤维化，进一步发展为肝硬化。迄今为止，由于缺少有效的治疗手段，肝纤维化依旧是世界范围的健康难题。肝星状细胞是肝脏纤维发生的关键。自然杀伤（NaturalKiller，NK）细胞通过抑制肝星状细胞，进而抑制肝纤维化进展的现象已有报导。在我们实验室的前期研究中发现，Toll样受体3的配体polyI:C可以诱导肝Kupffer细胞分泌IL-18，继而激活NK细胞。由此，我们假设polyI:C与IL-18可以协同激活NK细胞，而激活后的NK细胞具有

5、对肝星状细胞的抑制作用。如果假设成立，进一步研究NK细胞的激活及其对肝星状细胞发挥抑制功能的相关机制。方法：为了验证NK细胞的激活，我们首先从健康成人的外周血分离纯化NK细胞，体外使用IL-18、polyI:C刺激，通过流式细胞术检测NK细胞表型，通过细胞内染色与ELISA检测IFN-γ的分泌。为了研究NK细胞激活的信号传导，我们使用westernblot检测IL-18、polyI:C单独与共同刺激时，NK细胞内部分信号分子的磷酸化。通过细胞共培养，研究NK细胞与研究激活后的NK细胞对肝星状细胞的调控。

6、肝星状细胞的凋亡通过PI、AnnexinV的染色鉴定。结果：IL-18与polyI:C协同激活NK细胞的CD69和TRAIL的表达，以及IFN-γ的分泌。IL-18与polyI:C通过p38MAPK/PI3K信号通路激活NK细胞。激活后的NK细胞通过脱颗粒效应杀伤肝星状细胞。激活的NK细胞膜上表达的TRAIL参与了NK细胞对肝星状细胞的脱颗粒效应以及杀伤作用。结论：IL-18与polyI:C通过p38MAPK/PI3K协同激活的NK细胞，通过TRAIL参与的脱颗粒效应杀伤肝星状细胞。I关键词：自然杀伤细

7、胞,肝星状细胞,脱颗粒效应,p38MAPK,TRAILIIAbstractCytotoxicityofIL-18andpolyI:C-activatedNKcellsonhepaticstellatecellsanditsmechanismBackgrounds:Sustainedliverinjuryinducedbymultiplecausesleadstothegraduatereplacementofnormalstructureofhepaticlobulesbyscartissue,resu

8、ltinginhepaticfibrosisandcirrhosis.Liverfibrosisremainsaworldwidehealthproblemduetothelackofeffectivetreatments.Hepaticstellatecellsarethekeytoliverfibrogenesis.IthasbeenreportedthatNKcellsinhibithepaticstellatecellsandpro