上调胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1对子宫内膜癌细胞系hec-1a生物学功能的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniVers埘forthedegreeofMasterIIllpactofup—regulatinginsulinlikegrowthfactorbindingprotein—relatedprotein1(IGFBP-rP1)geneonHumanEndometrialCancer-1一A(HEC一1A)bi0109ical向nctionByXiaofenZhangSupeⅣisor：ProfRuixiaGuoProfessionofObes

2、tetricsandGynecologyTheFirstAmliatedHospitalofZhengzhouUniVersityMarch2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归

3、属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：拓潞日期⋯￥年r月矽日摘要上调胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1对子宫内膜癌细胞系HEC一1A生物

4、学功能的影响硕士研究生张晓芬导师郭瑞霞教授郑州大学第一附属医院妇产科郑州市450052摘要背景与目的近些年来子宫内膜腺癌的发病率逐年上升。肥胖，高血压，糖尿病和血脂异常的多种危险因素共同构成的代谢综合征与子宫内膜腺癌的发病密切相关。而胰岛素抵抗是代谢综合征的中心环节。胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin1ikegrowmf．actorbindingproteins，IGFBPs)是胰岛素样生长因子(insulin．1ikegrowmfactor，IGF)体系中的重要成员，其中包括与IGF有较高的

5、结合能力的IGFBPl—6，及新近发现的与胰岛素有较高结合能力的IGFBP7．15，又被称为胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白(insulinlikegrowthfactorbindingprotein—relatedprotein，IGFBP．rP)，其中研究最多最重要的是lGFBP．rPl，与IGFBPl．6相比，lGFBP．rPl与IGFl和IGF2的结合能力分别要弱5倍和20．25倍，但与胰岛素的结合能力要强500倍。胰岛素和IGFBP．rPl结合后使胰岛素降低或丧失正常生理作用，导致机体胰岛

6、素敏感性下降，引起胰岛素抵抗，从而参与一些恶性肿瘤如结肠癌、乳腺癌等的发生发展，并且高胰岛素血症和低IGFBP．rPl水平是子宫内膜癌的高危因素。但是1GFBP．rPl在子宫内膜癌细胞发挥何种作用尚不清楚，因此，本研究应用脂质体介导的基因转染方法将重组质粒pEx一2_IGFBP．rPl转染lGFBP．rPl低表达的子宫内膜癌细胞系HEC．1A，观察上调lGFBP．rPl对子宫内膜癌细胞系HEC．1A的增殖速率，凋亡及细胞周期的影响，探讨1GFBP．rPl在子宫内膜癌中发挥的具体作用。摘要方法1．细胞

7、转染：应用脂质体介导的基因转染方法将重组质粒转染子宫内膜癌细胞系HEC．1A，分为三组：转染pEX．2一IGFBP．rPl组、转染空质粒组、空白对照组(仅转染试剂)，并用荧光显微镜观察转染效率；2．应用QRT_PCR技术检测各组细胞中IGFBP．rPl的RNA表达；3．应用蛋白印迹法(WbstemBlot)测定各组细胞IGFBP．rPl蛋白表达；4．应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测各组细胞24h、48h、72h增殖抑制率；5．采用流式细胞技术应用mmexinV-APC／PI双染法测定各组细胞的

8、凋亡率。采用PI单染法测定各组细胞的细胞周期；6．统计学方法：应用SPSS16．0软件进行数据统计分析，所得结果以X±s表示。采用重复测量的方差分析来比较各组细胞的增殖抑制率，用单因素方差分析比较各组细胞的mIⅢA，蛋白表达，细胞凋亡率和细胞周期，两两比较采用LSD法。结果1．转染pEX．2一IGFBP．rPl组IGFBP．rPlmRNA的相对拷贝量为：2．699±O．293，蛋白相对表达量为：1．126±0．074与转染空质粒组(1．296±O．169，O．889±