羟基乙酸微球的研制及其介入治疗兔肝癌的实验研究

《羟基乙酸微球的研制及其介入治疗兔肝癌的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第二军医大学硕士学位论文羟基乙酸微球的研制及其介入治疗兔肝癌的实验研究姓名：邢冬娟申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：徐爱民201205羟基乙酸微球的制备及其介入治疗兔肝癌的实验研究摘要目的一、研究羟基乙酸乙基纤维素微球的制备方法及其体外释放特征。二、评价羟基乙酸乙基纤维素微球对兔VX2肝肿瘤的介入治疗作用。材料和方法一、羟基乙酸乙基纤维素微球的制备及检测(一)制备工艺的确定以羟基乙酸作为药物，乙基纤维素作为大分子包裹材料，采用溶剂蒸发法制备羟基乙酸乙基纤维素微球。(二)优化设计制备条件在一定范围内羟基乙酸的浓度及乙基纤维素的量是影响微球颗粒粒径大小及其均匀度的主要因素。考察不同条件下

2、制备微球的外观、粒径、载药量及包封率，优化微球制备条件。(三)载药量和包封率的测定精密称取羟基乙酸乙基纤维素微球冻干粉木100mg，置于10ml离心管中，加二氯甲烷2ml，水浴超声15min溶解，加蒸馏水2ml萃取，离心(869×g)5min，上层水溶液用滴管移至10ml容量瓶中，萃取5次后定容。利用标准曲线方程，计算微球的载药量和包封率。载药量=含药量／微球总量x100％；包封率=实际载药量／理论载药量×100％。(四)微球粒径分布及测定取微球于激光粒度分析仪，测量微球的粒径分布。(五)微球的形态观察取适量干燥羟基乙酸乙基纤维素微球，用导电胶带粘连固定于样本台，喷金后在扫描电镜下观察微球

3、形态。(六)微球的体外释放特征测定称取微球适量，置于离心管内，加入PH7．4PBS，放入台式水浴恒温振荡器中，置温度37+0．5。C，转速100rpm．在设定时间点离心取上清溶液，用高效液相色谱仪，于220nm处测定吸光度，按高效液相色谱测定释药量，计算累计释药百分率。第二军医大学硕士学位论文二、羟基乙酸乙基纤维素微球介入治疗兔肝肿瘤的研究(一)实验动物新西兰大白兔30只，由第二军医大学动物中心提供，体重2．5-3．5kg，雌雄不限。制备肝脏肿瘤模型。(二)动物模型建立VX2肿瘤经新西兰大白兔肝脏内种植传代，取肿瘤已长到3--,4cm直径的种兔，以1．5％戊巴比妥1．5ml／kg经耳缘静脉

4、麻醉后固定，消毒铺巾，将肿块整体剥离取出，生理盐水漂洗，切取鱼肉样肿瘤组织数块放入小烧杯中，加入少量生理盐水，眼科剪反复剪切使肿瘤组织块成lmm见方的组织块备用。经耳缘静脉将种植兔麻醉后，仰卧位固定于兔台，常规腹部脱毛、消毒，取腹正中切口，进腹后轻轻拉出肝脏，将含有VX2瘤块注入肝实质内，轻压迫创面止血后将肝脏送回腹腔，关腹。术后连续3天肌肉注射青霉素(5000u／只)。2周后进行介入治疗。(三)实验分组兔VX2肝肿瘤模型30只，因介入治疗的效果受肿瘤体积因素的影响，植瘤后13d(即行TACEfiI

5、『I天)行CT检查，计算荷瘤兔肿瘤体积，将其按肿瘤体积随机分为3组，经右侧股动脉插管至肝动

6、脉，行造影后向肿瘤供血动脉给药：A组羟基乙酸．乙基纤维素微球组(n=10)，注入羟基乙酸乙基纤维素微球混悬液lml(0．029／m1)；B组碘油组(n_10)，注入碘油lml；C组生理盐水对(n=10)，注入生理盐水lml。(四)动物模型的介入治疗操作介入治疗时间选择在接种后2周，模拟人肝动脉插管介入治疗方法进行。以1．5％戊巴比妥1．5ml／kg经耳缘静脉麻醉后固定，切开皮肤，暴露分离右股动脉，穿刺置入3F微导丝和微导管。用导丝在T12和L1椎体水平腹主动脉前壁寻找腹腔干动脉开口，导管跟导丝入腹腔动脉后“冒烟”，证实后造影(总量2ml，速率O．5ml／s)。造影明确肿瘤血管及染色后超选肝

7、动脉给药。由于兔肝动脉细小，在插管超选肿瘤供血动脉过程中，部分实验兔血管受到导管刺激后，容易诱发痉挛，这时需稍稍撤出导管，注入利多卡因0．5．1ml后再进行介入操作。术中轻柔操作，减少对血管壁的刺激是减少血管痉挛，减少术后死亡率，提高手术成功的关键。(五)结果观察羟基乙酸微球的制备及其介入治疗兔肝癌的实验研究①介入治疗前及介入治疗后1周行心脏取血化验肝功，观察各组肿瘤兔肝功变化；②介入治疗前(V1)及治疗后1周(V7)分别行肝脏螺旋CT扫描，测量瘤灶大小，按公式计算肿瘤体积【V=ab2／2(V为估计体积，a为肿瘤最大径，b为肿瘤最小径)】，按公式(V7Ⅳ卜1)计算介入治疗前后的各组肿瘤体积

8、比计算肿瘤生长率(growthrotes，GR)；⑨介入治疗后2周各组随机挑选5只以观察生存时间，以治疗后次日起观察生存天数，并以生理盐水组为对照计算生命延长率(％)。生命延长率(％)=(治疗组平均存活天数／生理盐水组平均存活天数。1)×100％。④其余动物均予处死，切取肿瘤组织最大面，避开坏死组织过多的部分，厚约2---3mm，移植瘤组织以1O％中性缓冲甲醛液固定，石蜡包埋切片4“m，HE染色，免疫组化采用EnVisi