iudr壳聚糖纳米微粒研制及其治疗兔肝癌实验的研究

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1、125中文摘要I-UdR-壳聚糖纳米微粒的研制及其治疗兔肝癌的研究中文摘要目的1.通过制备高脱乙酰度低分子量壳聚糖（Chitosan，CS），研制得到壳聚糖纳米微粒（Chitosannanoparticles，CS-NP）作为具有肝癌靶向作用的药物载体，装125125载肿瘤内放射治疗药物I-脱氧尿嘧啶核苷酸（I-UdR）后成为具有肿瘤靶向性125125和缓释性能的I-UdR-壳聚糖纳米微粒（5-[I]Iodo-2’-Deoxyuridine-Chitosan125-Nanoparticles，I-UdR-CS-

2、NP）。确定最佳工艺条件并鉴定其理化性质、生物相125容性和药物释放特性，分析I-UdR-CS-NP在新西兰兔体内的药代动力学、组织分布和内照射细胞生物学效应。1252.分析验证I-UdR-CS-NP对兔肝癌原位模型的被动靶向性，特别是通过肝动脉介入给药方式所能达到的肝癌靶向能力。3.观察分析CS-NP进入肿瘤细胞途径及其在亚细胞水平的分布、转运、降解和药物释放方式。方法1.采用间歇水解法和辐射降解法制备高脱乙酰度低分子量壳聚糖，并分析其红外光谱。2.离子交联法制备CS-NP，并通过正交试验优化其制备工艺。采用

3、激光粒度分析仪、透射电子显微镜和zeta电位仪分析鉴定CS-NP的粒径、分散度、形态和表面性状以及zeta电势等物理性状和表征。3.通过MTT法和流式细胞仪检测肝癌细胞和正常肝组织细胞与CS-NP共同孵育后的存活分数和凋亡率，以评价其生物相容性。1254.离子交联法制备I-UdR-CS-NP，并通过单因素分析法确定其最佳工艺条件。测量其粒径、分散度，并用透射电镜观察其形貌。1255.采用动态透析法测量I-UdR-CS-NP的体外药物累积释放率，并绘制累积释放曲线，观察比较载药量与释药特性的关系，确认其是否具备长

4、效缓释特性。II125I-UdR-壳聚糖纳米微粒的研制及其治疗兔肝癌的研究中文摘要1256.分析外周静脉注射I-UdR-CS-NP后实验兔的药代动力学特性和药物组织分布特征。1257.观察分析实验兔注射I-UdR-CS-NP后的血液生化指标和骨髓图片的变125化，评价I-UdR-CS-NP在生物体内的毒副作用。8.离子交联法制备异硫氰酸荧光素标记壳聚糖纳米微粒（FITC-CS-NP），并采用激光粒度分析仪、透射电子显微镜和zeta电位仪分析鉴定FITC-CS-NP的粒径、分散度、形态和表面性状以及zeta电势等

5、物理性状和表征。1259.体外细胞摄取实验分析肝癌细胞和正常肝组织细胞对I-UdR-CS-NP的摄125取量及其时间效应和剂量效应，以验证I-UdR-CS-NP的肝癌靶向性。10.采用激光共聚焦显微镜观察FITC-CS-NP在肝癌细胞和正常肝细胞中不同时段的分布量和位置，验证CS-NP作为药物载体的肝癌靶向性。11.采用ROI区域时间序列扫描技术连续定量分析FITC-CS-NP进入肝癌细胞和正常肝组织细胞的过程。12512.采用MTT法、流式细胞仪观察肝癌细胞和正常肝细胞经I-UdR-CS-NP作用后的存活分数

6、和增殖指数。13.用中性单细胞凝胶电泳技术检测肝癌细胞和正常肝细胞经125I-UdR-CS-NP作用后2h的DNA链断裂程度和作用后24h的DNA损伤修复能力，125以评估I-UdR-CS-NP对肿瘤细胞的杀伤效应。14.超声引导下采用经皮穿刺术在实验兔肝左叶种植VX2瘤块，制备兔肝癌原位模型，并做病理学鉴定。15.兔肝癌原位模型在CT引导下采用Seldinger微导管肝动脉插管术灌注125125I-UdR-CS-NP，SPECT分时段观察I-UdR-CS-NP在兔体内的分布及其对原位125肝癌的靶向性。测量并

7、分析I-UdR-CS-NP在肿瘤和其他组织中的分布，以验证其肿瘤靶向性。16.将用药后48h的肿瘤组织做病理切片后进行Tunel染色，观察细胞凋亡率125改变，以评价I-UdR-CS-NP的抑瘤效果。17.激光共聚焦显微镜观察37℃和4℃条件下FITC-CS-NP及其原料FITC-CS长链分子进入肿瘤细胞的行为特征，以观察FITC-CS-NP进入细胞的耗能情况。18.采用CPZ、Fil、Amil分别抑制以clathrin-经典途径、caveolae-途径和巨胞III125中文摘要I-UdR-壳聚糖纳米微粒的研制

8、及其治疗兔肝癌的研究125饮三条纳米微粒进入细胞的主要途径后，定量分析I-UdR-CS-NP进入肝癌细胞HepG2的量，以分析其内化途径类型。并用激光共聚焦显微镜观察验证FITC-CS-NP通过不同途径进入肝癌细胞的跨膜过程及其在细胞内的分布特征。19.采用多色荧光染色技术观察FITC-CS-NP在亚细胞水平的动态分布、转运和降解的行为特征。结果1.间歇水解法和辐射降解法制备的壳聚糖脱