iudr壳聚糖纳米微粒的研制及其治疗兔肝癌的实验研究

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1、博士学位论文论文题目125I-UdR-壳聚糖纳米微粒的研制及其治疗兔肝癌的实验研究PreparationofChitosanNanoparticlesCountaining5-[125I]Iodo-2’-deoxyuridineandApplicationintheTherapyofRabbitHepaticcarcinoma研究生姓名杨辰指导教师姓名刘芬菊专业名称放射生物学研究方向肿瘤放射生物学基础与临床论文提交日期2013年3月中文摘要125I-UdR-壳聚糖纳米微粒的研制及其治疗兔肝癌的研究中文摘要目的1.通过制

2、备高脱乙酰度低分子量壳聚糖（Chitosan，CS），研制得到壳聚糖纳米微粒（Chitosannanoparticles，CS-NP）作为具有肝癌靶向作用的药物载体，装载肿瘤内放射治疗药物125I-脱氧尿嘧啶核苷酸（125I-UdR）后成为具有肿瘤靶向性和缓释性能的125I-UdR-壳聚糖纳米微粒（5-[125I]Iodo-2’-Deoxyuridine-Chitosan-Nanoparticles，125I-UdR-CS-NP）。确定最佳工艺条件并鉴定其理化性质、生物相容性和药物释放特性，分析125I-UdR-CS-

3、NP在新西兰兔体内的药代动力学、组织分布和内照射细胞生物学效应。2.分析验证125I-UdR-CS-NP对兔肝癌原位模型的被动靶向性，特别是通过肝动脉介入给药方式所能达到的肝癌靶向能力。3.观察分析CS-NP进入肿瘤细胞途径及其在亚细胞水平的分布、转运、降解和药物释放方式。方法1.采用间歇水解法和辐射降解法制备高脱乙酰度低分子量壳聚糖，并分析其红外光谱。2.离子交联法制备CS-NP，并通过正交试验优化其制备工艺。采用激光粒度分析仪、透射电子显微镜和zeta电位仪分析鉴定CS-NP的粒径、分散度、形态和表面性状以及zet

4、a电势等物理性状和表征。3.通过MTT法和流式细胞仪检测肝癌细胞和正常肝组织细胞与CS-NP共同孵育后的存活分数和凋亡率，以评价其生物相容性。4.离子交联法制备125I-UdR-CS-NP，并通过单因素分析法确定其最佳工艺条件。测量其粒径、分散度，并用透射电镜观察其形貌。5.采用动态透析法测量125I-UdR-CS-NP的体外药物累积释放率，并绘制累积释放曲线，观察比较载药量与释药特性的关系，确认其是否具备长效缓释特性。125I-UdR-壳聚糖纳米微粒的研制及其治疗兔肝癌的研究中文摘要6.分析外周静脉注射125I-Ud

5、R-CS-NP后实验兔的药代动力学特性和药物组织分布特征。7.观察分析实验兔注射125I-UdR-CS-NP后的血液生化指标和骨髓图片的变化，评价125I-UdR-CS-NP在生物体内的毒副作用。8.离子交联法制备异硫氰酸荧光素标记壳聚糖纳米微粒（FITC-CS-NP），并采用激光粒度分析仪、透射电子显微镜和zeta电位仪分析鉴定FITC-CS-NP的粒径、分散度、形态和表面性状以及zeta电势等物理性状和表征。9.体外细胞摄取实验分析肝癌细胞和正常肝组织细胞对125I-UdR-CS-NP的摄取量及其时间效应和剂量效应

6、，以验证125I-UdR-CS-NP的肝癌靶向性。10.采用激光共聚焦显微镜观察FITC-CS-NP在肝癌细胞和正常肝细胞中不同时段的分布量和位置，验证CS-NP作为药物载体的肝癌靶向性。11.采用ROI区域时间序列扫描技术连续定量分析FITC-CS-NP进入肝癌细胞和正常肝组织细胞的过程。12.采用MTT法、流式细胞仪观察肝癌细胞和正常肝细胞经125I-UdR-CS-NP作用后的存活分数和增殖指数。13.用中性单细胞凝胶电泳技术检测肝癌细胞和正常肝细胞经125I-UdR-CS-NP作用后2h的DNA链断裂程度和作用后

7、24h的DNA损伤修复能力，以评估125I-UdR-CS-NP对肿瘤细胞的杀伤效应。14.超声引导下采用经皮穿刺术在实验兔肝左叶种植VX2瘤块，制备兔肝癌原位模型，并做病理学鉴定。15.兔肝癌原位模型在CT引导下采用Seldinger微导管肝动脉插管术灌注125I-UdR-CS-NP，SPECT分时段观察125I-UdR-CS-NP在兔体内的分布及其对原位肝癌的靶向性。测量并分析125I-UdR-CS-NP在肿瘤和其他组织中的分布，以验证其肿瘤靶向性。16.将用药后48h的肿瘤组织做病理切片后进行Tunel染色，观察细

8、胞凋亡率改变，以评价125I-UdR-CS-NP的抑瘤效果。17.激光共聚焦显微镜观察37℃和4℃条件下FITC-CS-NP及其原料FITC-CS长链分子进入肿瘤细胞的行为特征，以观察FITC-CS-NP进入细胞的耗能情况。18.采用CPZ、Fil、Amil分别抑制以clathrin-经典途径、caveolae-途径和巨胞中文摘要