btla信号在t细胞活化启动和早期阶段的调节作用

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3、的抑制性受体。人的BTLA基因定位于染色体3q13．2，与小鼠具有48％的同源性。BTLAmRNA在脾脏及淋巴结组织中高表达，在肾脏、肝脏、肺、脑、心脏及肌肉等组织中表达量都很低，甚至不表达。BTLA广泛表达于T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞和NK细胞表面。BTLA含有一个信号序列、一个免疫球蛋白可变区(IgV)样的胞外段、跨膜区和大约100个氨基酸的胞浆区。BTLA胞浆区存在3个重要的含酪氨酸残基的基序：潜在的Grb2结合位点，免疫受体酪氨酸抑制基序和免疫受体酪氨酸转换基序。研究表明，BTLA与其配体HVEM结合可以抑制T细胞的增殖和细胞因

4、子的分泌，推迟细胞周期的进程，从而抑制或终止免疫应答。在持续的抗原刺激下，BTLA高度选择性表达在无能CD4+T细胞上，表明BTLA信号在诱导与维持T细胞无能状态的过程中有重要作用。另外，BTLA不仅在在维持外周免疫耐受中具有重要作用，还可以预防自身免疫疾病的发生，终止炎症反应，抑制移植免疫应答。BTLA在初始和活化T细胞上都有表达，因此，Murphy提出BTLA可能在T细胞活化的各个阶段尤其是早期阶段发挥作用。本研究首先分析了BTLA—HVEM顺式复合物的存在对细胞表面BTLA分子表达水平检测的影响，进而研究了BTLA在T细胞活化起始和早期阶段

5、的调节作用。一、BTLA—HVEM顺式复合物对细胞表面BTLA分子检测的影响【目的】T细胞和U937细胞表面存在BTLA和HVEM共表达的现象。探讨BTLA—HVEM顺式复合物存在对细胞表面BTLA分子检测的影响。【方法】分离人外周血单个核细胞，经阴性选择磁珠分离纯化获得T淋巴细胞。采用流式细胞术的方法，用抗不同BTLA位点的商品化单抗MIH26和本室研制的单抗8H9分别检测U937和T细胞等细胞表面BTLA分子的表达水平。293T／BTLA基因转染细胞上BTLA分子的检测采用8H9单抗。【结果】商品化单抗MIH26(0．599)检测T细胞和U9

6、37细胞上BTLA分子的表达量分别为90％以上，而8H9单抗(199)检测到二者的表达水平分别为42．2％、中文摘要BTLA信号在T细胞活化启动和早期阶段的调节作用30．8％。采用0．0299和O．0599的8H9单抗检测293T／BTLA转基因细胞株，显示BTLA分子的表达量分别为80％和91．4％。【结论】T细胞和U937细胞上共表达的BTLA和HVEM形成顺式复合物，影响8H9对BTLA的检测，而不影响MIH26的检测。二、BTLA对T细胞活化启动和早期阶段的调节作用【目的】观察BTLA在T细胞活化过程中的表达变化，探讨其在T细胞活化各个阶

7、段尤其是早期阶段的抑制作用。【方法】分离人外周血单个核细胞，经磁珠分选获得纯化的T细胞。用激发型CD3抗体和CD28抗体刺激T细胞活化，采用流式细胞术，检测BTLA、CTLA一4和PD．1在T细胞活化过程中的动态表达。激发型CD3抗体和CD28抗体在加入BTLA单抗8H9的情况下刺激T细胞活化，流式细胞术检测T细胞活化早期标志分子CD25和CD69的表达。激发型CD3抗体和CD28抗体联合HVEM—Fc或者BTLA单抗8H9，观察BTLA信号在活化后的不同时间对T细胞增殖的作用。同时，采用ELISA方法检测8H9对CD3单抗联合CD28单抗刺激的

8、T细胞分泌IL一2和IFN一1，的影响。预先用CD3和CD28抗体刺激T细胞活化后，在24h，48h，72h分别加入8H9抗体并交联，观