四氢嘧啶类化合物zl-5015的免疫抑制作用及其作用机制研究

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1、南方医科大学2010级博士学位论文四氢嘧啶类化合物ZL．5015的免疫}rp$1J作用及其作用机制研究StudyofImmunosuppressiveActivitiesoftheTetrahydropyrimidineCompoundZL-5015andtheUnderlyingMechanism课题来源：广东省自然科学基金($2011010003789)高等学校博士学科点专项科研基金(20114433110013)学位申请导师姓专业名培养类培养层所在学人伦玉宁名雷林生称药理学型学术型次全日制博士院药学院2013年4月2日广州博士学位论文四氢嘧啶类化合物ZL．5015的免疫抑制作

2、用及其作用机制研究博士研究生：伦玉宁指导教师：雷林生教授摘要目的新型四氢嘧啶类化合物ZL-5015(1，3-二环戊基-1，2，3，6-四氢嘧啶一4，5-二甲酸二乙酯)兼具抗炎和免疫抑制活性，本研究采用体内和体外实验模型探讨ZL．5015的免疫抑制作用特点及作用机制，为后续的结构改造及深入的作用机制研究提供参考信息。研究内容1．ZL．5015对正常小鼠免疫功能的影响1．1对体液免疫功能的影响⋯兔红细胞免疫小鼠产生血清溶血素(IgM)模型1．1．1材料与方法BALB／c小鼠50只，随机分为5组，各组动物均连续7天给药，给药后第2天上午，每只鼠腹腔注射20％ⅣIv)的兔红细胞生理盐水0．

3、2ml进行免疫，同日下午继续给药，免疫后第6天(免疫当天为第0天)，动物摘眼球取血，分光光度法检测各组小鼠血清中的溶血素水平。1．1．2结果ZL．5015高、中剂量组(200、100mg／kg．b．w)能明显抑制小鼠血清溶血素水平，抑制率分别为32．8％和20．0％(P=0．000，P=0．000)，ZL一5015低剂量组(50mg／kg．b．w)能轻微抑制小鼠血清溶血素水平，但与溶媒对照组比较摘要差异无统计学意义(P=-O．131)。1．2对细胞免疫功能的影响一二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型超敏反应(DTH)模型1．2．1材料与方法BALB／c小鼠50只，随机分为5组，给药

4、第一天用I％DNFB致敏小鼠，连续给药7天，于致敏后第7天，取1％DNFB丙酮一橄榄油(1：1)20gL均匀涂布于每只小鼠右耳的两面进行攻击。于攻击24h后，给小鼠称重，颈椎脱臼处死，剪下左右耳廓，以左右耳片质量差值作为肿胀度，并计算肿胀率。取出脾脏和胸腺称重并计算相应的器官指数。1．2．2结果ZL-5015高、中、低剂量组(200、100、50mg／kg．b．w)与模型组比较，均能显著抑制二硝基氟苯诱导的小鼠耳廓肿胀(P=O．000，P=0．000，P=0．015)，抑制率分别为：56．45％、47．58％、29．84％。ZL一5015高剂量(200mg／kg．b．w)能抑制小鼠

5、的脾脏指数(尸=0．013)，中、低剂量组(100、50mg／kg．b．w)无抑制作用(尸=0．482，P=0．418)。ZL一5015高、中、低剂量组(200、100、50mg／kg．b．w)对小鼠的胸腺指数无显著影响(尸=0．384，P=O．527，P=0．570)。1．3ZL-5015对网状内皮细胞(巨噬细胞)吞噬功能的影响(碳粒廓清实验)1．3．1材料与方法BALB／c小鼠50只，随机分为5组，连续给药7天。末次给药1h后，先称小鼠体重，每只小鼠尾静脉均注射印度墨汁(用生理盐水稀释6倍)，按0．1ml／lOg注射。分别于注射后于1min(t1)和10min(tlO)tJx鼠

6、眼球取血，检测OD450值，最后将小鼠颈椎脱臼处死，同时摘取小鼠肝脏、脾脏，并称湿重，计算廓清指数(K)及吞噬指数(A)。1．3．2结果化合物ZL-5015高、中、低剂量组(200、100、50mg／kg．b．w)对小鼠吞噬指数A无明显影响(尸=1．000，P=0．999，P=1．000)。II博士学位论文2．ZL-5015对大鼠佐剂性关节炎模型的影响2．1ZL．5015对大鼠佐剂性关节炎模型关节炎指数、足趾肿胀度、体重的影响2．1．1材料与方法雌性SD大鼠48只，随机分为6组，每只鼠左后足趾皮内注射100uL弗氏佐剂，致炎后第16天开始给药和测量，共给药12天。采用排水法测足部体

7、积：在大鼠足部踝骨关节突出部位划一条线作为标记，用足趾肿胀仪测量，间隔4天测一次足趾肿胀情况及体重。SD大鼠免疫后，根据大鼠四肢关节炎症的红、肿及硬化程度，计算多发性关节炎指数。2．1．2结果致炎后第20天，ZL-5015高剂量(200mg／kg．b．w)处理组关节炎指数与模型组比较明显下降，下降率为20．0％(P--0．010)，说明此时高剂量药物开始起效。对足趾肿胀及体重无显著影响。致炎后第24天，ZL一5015高、中、低剂量(200、100、50mg／kg．b．