四氢嘧啶类化合物zl-5015的抗炎作用及其作用机制研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文四氢嘧啶类化合物ZL．5015的抗炎作用及其作用机制研究Studyofanti-inflammatoryeffectandtheunderlyingechani!oftetrahydropyrimidimderivativeZL5015mechanismsofatetrahydroDyrimidinederivativeZL-5015课题来源：广东省自然科学基金(S2011010003789)国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金(20114433110013)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院夏鸿雷林生药理学学术型硕士研究生药

2、学院2013年4月1日广州硕士学位论文四氢嘧啶类化合物ZL．5015的抗炎作用及其作用机制研究硕士研究生：夏鸿指导教师：雷林生目的摘要研究四氢嘧啶类化合物ZL．5015(1，3一二环戊基一1，2，3，6一四氢嘧啶一4，5一二甲酸二乙酯)的抗炎镇痛作用及其作用机制。方法1．以丁炔二甲酸二乙酯、甲醛、环戊胺为原料，冰醋酸为催化剂，在乙醇溶剂中经氨基化作用、Mannich反应、亲核加成反应和脱氢环化反应等一步法合成四氢嘧啶类化合物ZL．5015。经柱层析分离纯化。2．采用二甲苯诱导小鼠耳郭肿胀模型，观察ZL．5015体内给药的抗炎作用。取BALB／c小鼠50只，随机均分为5组，分别为溶

3、媒对照组，阿司匹林阳性药物组(100mg／kg．b．w)及化合物ZL-5015高、中、低剂量组(100、50、25mg／kg．b．w)。各组均用0．5％CMC-Na的水溶液配制。每日灌胃1次，连续给药3天。末次给药后1h，在每只小鼠右耳上均匀涂布二甲苯20ul致炎，40min后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳郭线剪下左、右耳片，用内径为7mm的打孔器分别在左、右耳相同位置打下耳片，称重，计算耳郭肿胀度。3．采用角叉菜胶诱导大鼠足趾肿胀模型，观察ZL．5015对大鼠体内给药的抗炎作用。取SD大鼠40只，随机均分为5组，分别为溶媒对照组，阿司匹中文摘要林阳性药物组(100mg／kg．b．w)

4、及化合物ZL．5015高、中、低剂量组(100、50、25mg／kg．b．w)。各组均用0．5％CMC．Na的水溶液配制。每日灌胃1次，连续给药3天。末次给药后1h，从大鼠右后足趾向远心端方向皮下注射高压灭菌的1％角叉菜胶生理盐水液0．1ml／只大鼠，并用记号笔在踝关节处做好标记，用大鼠足趾容积测量仪分别在注射1％角叉菜胶生理盐水液前(0h)，及后1、2、3、4、5h时刻测定大鼠右后足容积。计算大鼠足趾肿胀度。4．采用醋酸诱导的小鼠扭体模型，观察ZL．5015体内给药的抗炎镇痛作用。取BALB／c小鼠50只，随机均分为5组，分别为溶媒对照组，阿司匹林阳性药物组(100mg／kg．

5、b．w)及化合物ZL-5015高、中、低剂量组(100、50、25mg／kg．b．w)。各组均用0．5％CMC-Na的水溶液配制。每日灌胃1次，连续给药3天，末次给药后1h，按O．1ml／109．b．W腹腔注射新配制的0．7％醋酸生理盐水液。观察并记录注射0．7％醋酸生理盐水液后20min内小鼠扭体次数。5．采用热板致痛模型，观察ZL．5015体内给药对小鼠的镇痛作用。取BALB／c小鼠若干只(大于50只)，体重(20-士2)g，雌性，实验前经50℃热板筛选剔除痛阈值大于30s或小于10s的动物，随机均分为5组，分别为溶媒对照组，曲马多阳性药物组(10mg／kg．b．w)及化合物

6、ZL-5015高、中、低剂量组(100、50、25mg／kg．b．w)。各组均用O．5％CMC-Na的水溶液配制。每日灌胃1次，连续给药3天，末次给药后1h测定痛阈，以小鼠足部接触热板到开始舔后足的时间为痛阈值。观察并记录痛阈。6．采用MTT法检测ZL．5015对小鼠巨噬细胞和RAW264．7巨噬细胞代谢活力的影响。7．采用LPS(1099／m1)刺激小鼠腹腔巨噬细胞以及RAW264．7巨噬细胞活化作为体外炎症模型，观察ZL．5015体外对腹腔巨噬细胞和RAW264．7巨噬细胞分泌炎症相关因子的影响。采用Griess试剂盒检测一氧化氮(NO)的含量；ELISIA法检测白细胞介素一

7、1(IL．113)、白细胞介素．6(IL．6)、白细胞介素．10(IL一10)、肿瘤坏死因子cL(n妤一伐)、前列腺素E2(PGE2)的含量。II硕士学位论文8．采用LPS(101．tg／m1)刺激小鼠腹腔巨噬细胞以及RAW264．7巨噬细胞活化作为体外炎症模型，观察ZL．5015体外对腹腔巨噬细胞和RAW264．7巨噬细胞表达COX．2、iNOSmRNA的影响。实时荧光定量PCR法检测目的基因mRNA的相对含量(2。△Q，以GAPDH为内参)。结果一步法合成的四氢嘧啶类化合物Z