长链非编码rna-pca3在前列腺癌中的功能及分子机制的初步研究

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1、万方数据复旦大学硕士研究生毕业论文长链非编码RNA．PCA3在前列腺癌中的功能及分子机制的初步研究研究生：学科专业：所在单位：导师：指导教师：刘晓军肿瘤学复旦大学附属肿瘤医院姚旭东教授胡维国教授万方数据目录中英文缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10第一部分pGLV3／H1一shRNA干扰稳转株及pCDH．GFP-PCA3过表达稳转株的

2、筛选与验证1．1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯151．2材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯151．3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯281．4讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯341．5小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35第二部分研究PCA3干扰和过表达后对前列腺癌细胞功能的影响及机制的初步研究2．1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．362．2材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯362．3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯402．4讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯502．5小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯532．6参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．54附录：综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56硕士期间发表学术论文和研究成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．66致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．67论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯68论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．68万方数据复旦大学硕士毕业论文长链非编码RNA(IncRNA)-PCA3在前列腺癌中的功能及分子机制的初步研究万方数据复旦大学硕士毕业论文长链非编码R

4、NA(1ncRNA)．PCA3在前列腺癌中的功能及分子机制的初步研究中文摘要第一部分：pGLV3／H1一shRNA干扰稳转株及pCDH．GFP．PCA3过表达稳转株的筛选与验证目的：PCA3基因在前列腺癌中高度特异性的表达，预示着PCA3对前列腺癌的发生发展起着重要作用。目前，PCA3在前列腺癌中的功能及机制尚不清楚。为了探究其功能，我们通过构建PCA3的干扰及过表达载体，并筛选出相应的稳转株，为后续的体外功能研究提供依据。方法：从Genbank中查找PCA3基因的序列号及其对应序列，使用Premier5．0软件设计针对PCA3分子的sh

5、RNA，分别构建4对pGLV3／HI．sh2456，pGLV3／H1．sh2618，pGLV3／H1．sh2702及pGLV3／H1．sh2913干扰载体及pGLV3／H1．control对照，以下调其在LNCaP细胞中的表达。将构建好的干扰载体包装成病毒后感染LNCaP细胞，经realtimePCR验证后筛选出干扰效率较高的细胞株；从PCA3高表达的前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA，然后反转录成cDNA。设计三对引物，以cDNA为模板扩增3个分片段，通过重叠延伸后连接成全长构成PCA3。将PCA3与pCDH．GFP质粒分别进行双酶

6、切后进行连接，转化感受态细胞DH5a，挑选克隆后并经PCR、酶切进行验证，送测序，。将构建好的pCDH．GFP．PCA3表达质粒包装成病毒后感染前列腺癌细胞株DUl45及PC3，流式分选并经realtimePCR验证后获得分别过表达PCA3及含空载的稳定细胞株。结果：测序结果表明成功构建了干扰载体，而且realtimePCR结果同时证实并建立了稳定低表达PCA3的前列腺癌细胞株及稳定高表达PCA3的前列腺癌细胞株。结论：PCA3干扰及过表达载体的成功构建，为深入研究PCA3基因在前列腺细胞中的作用奠定了基础，进而为探索前列腺癌治疗的新途径

7、提供了可能。第二部分：研究PCA3干扰和过表达后对前列腺癌细胞功能的影响及机制的初步研究目的：研究PCA3干扰和过表达后在体外对前列腺癌细胞的增殖、周期、迁移及侵袭的影响。方法：将第一部分筛选出的稳转细胞株，通过CCK．8法(PCA3过表达实验)和EdU法(PCA3干扰实验)及细胞克隆形成实验测定细胞增殖能力，通过流式细胞仪测定细胞周期，transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力。并将存在功能差异的干扰细胞进万方数据复旦大学硕士毕业论文长链非编码RNA(IncRNA)-PCA3在前列腺癌中的功能及分子机制的初步研究行转录组测序，探求两

8、组细胞在转录水平分子的表达差异。结果：下调PCA3的表达后，LNCaP细胞株实验组较对照组的增殖能力下降(P