长链非编码RNA Gm10768在肝脏糖异生中的作用与机制研究

《长链非编码RNA Gm10768在肝脏糖异生中的作用与机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、，，：：病．Ｉ索取号：０２５１１１２２４：１５１２０１０１９密级，公开雜：南京砰苑Ａ＃博士学位论文｜ｉ＾ｒ｜ＩｇＬＮＮＵＢＪ长链非编码ＲＮＡＧｍｌ０７６８在肝脏糖异生中的作用与机制研究研宄生：崔县伟指导教师：刘畅教授培养单位：生命科学学院一级学科：生物学二级学科：细胞生物学完成时间：２０１８年５月２０曰答辩时间：２０１８年５月２１日学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行

2、的研宄工作和取得的研究成果。本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构己经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究所做的贡献均己在论文中作了声明并表示了谢意。：日期ｔｉｔ学位论文作者签名：学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容、，可以采用影印、复印等手段保存汇编本学位论

3、文。学校可以向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅。（保密论文在解密后遵守此规定）保密论文注释－：本学位论文属于保密论文，密级：幺存保密期限为年。学位论文作者签名指导教师签名：日期日期：＞／中文摘要中文摘要，．肝脏是维持机体葡萄糖稳定的最重要组织器官可以通过糖原分解和糖异生两种方式增加葡萄糖的输出、调节血糖稳定。糖异生是指利用乳酸、丙酮酸、甘油、生糖氨基酸等底物生成葡萄糖的过程，肝脏是糖异生的主要场所。病理状态下，肝脏糖

4、异生被过度激活引发高血糖ｉ，是导致２型糖尿病（Ｔｅ２ｄａｂｅｔｅｓＴ２ＤＭ）的主要原因。ｙｐ，肝脏糖异生除受营养信号和激素水平的调节外，肝脏糖异生关键控制酶的转录活性是＇调控糖异生水平的关键。因此，揭示肝脏糖异生关键控制酶的转录调控因子，寻找ｆ效抑制肝脏过度糖异生内源性葡萄糖生成的方法，将有望为Ｔ２ＤＭ临床防Ｓ提供新的干预靶标。ＲＮＡＬＲＮＡ一（ｏｎｎｏｎｃｏｄＩＲＮＡ）是２００ｎｔｉｎｎｃ长链非编码ｇｇ，类长度在以上无蛋白编码能力的ＲＮＡｌｎｃＲＮＡ可

5、以在转录前、转录后、表观遗传学等多个。已证实ＩｎｃＲＮＡ在调控葡萄糖稳态层面参与生命活动调控，参与代谢性疾病如２。新近发现型糖尿病等的发生中同样起重要调节作用。ＬｎｃＲＮＡＭｅｇ３过表达可显著增加肝脏葡，３萄糖生成而肝脏特异性沉默Ｍｅｇ则有助于恢复糖尿病造成的小鼠葡萄糖代谢损伤；一另条可以被饥饿诱导的ｌｎｃＲＮＡＩｎｃＬＧＲ，已被证实可以通过结合异质核糖核蛋白Ｌ，抑制葡萄糖激酶活性以及糖原的存储，参与机体葡萄糖代谢调节ｌｎｃＲＮＡ数量。鉴于众多，在肝脏糖代谢研宄中的报道

6、依然较少，因此仍有大量功能未知的ｌｎｃＲＮＡ有待一步挖掘于进。一第部分基于髙通量测序技术的肝脏糖异生相关ｌｎｃＲＮＡ的筛选“”－我们以饥饿再进食小鼠模型为研宄对象，取肝脏组织采用高通量测序技术筛选糖异生相关ｌｎｃＲＮＡ。测序结果显示，在正常饮食组和１６ｈ饥饿组共计测得的一ｌｎｃＲＮＡ数量分别为２８３１２和３１９４７。进：１．与１６ｈ饥饿组比在正常饮，，步我们设置食组小鼠肝脏表达水平上调３倍以上；２．丰度高、测序读数（Ｃｏｕｎｔｉｎｇｒｅａｄｓ）＞５００；３．己被Ｇｅ

7、ｎＢａｎｋ注释为ｌｎｃＲＮＡ等参数进行筛选。结果显示仅Ｇｍｌ５４４１，４８３３４１１Ｃ０７Ｒｉｋ，Ｇｍｌ０７６８和４９３１４０８Ｄ１４Ｒｉｋ符合上述筛选标准。采用定量ＰＣＲ检测发现，４条ｌｎｃＲＮＡ不仅在受饥饿诱导的小鼠肝脏组织中表达显著上调，而且再进食后表达可以迅速回落到正常水平，但是只有４８３３４１１Ｃ０７Ｒｉｋ和Ｇｍｌ０７６８高表达于糖异生被过度激活的办／必小鼠肝脏组织中，提示二者可能参与肝脏糖异生调控，。因此一ＲＮＡ二进步我们采用ｉ的方法，沉默者在原代分离小鼠肝细胞中

8、的表达，明确４８３３４１１Ｃ０７Ｒｉｋ和Ｇｍｌ０７６８与糖异生调控关系。结果发现，Ｇｍｌ０７６８沉默后，细胞葡萄糖输出能力显著降低，提示其可能参与肝脏糖异生，而４８３３４１１Ｃ０７Ｒｉｋ无显著影Ｉ中文摘要；响。因此，我们初步锁定Ｇｍｌ０７６８作为深入研宄的对象。第二部分长链非编码ＲＮＡＧｍｌ０７６８在肝脏糖异生中的作用与机制研宄我们通过体外和体内实验揭示Ｇｍｌ０７６８在调控肝脏糖异生中的作用。Ｇｍｌ０７６８过表达可增强原代小鼠肝细胞葡萄糖生成能