肺癌细胞抗拒水疱口炎病毒凋亡效应的机理研究

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1、泸州医学院硕士学位论文目录1肺癌细胞抗拒水疱口炎病毒凋亡效应的机理研究⋯⋯⋯⋯11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯221·6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯341．7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯391．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯401．9英汉缩略词对

2、照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯452致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯463VSV研究进展(综述)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47泸州医学院硕士学位论文肺癌细胞抗拒水疱口炎病毒凋亡效应的机理研究摘要＼渊燃目的：水疱口炎病毒(vesicularstomatitisvirus，VSV)是一种很有前景的生物治疗方式，它能特异性诱导肿瘤细胞凋亡，目前对于它的研究主要集中在免疫应答系统(如IFN)、P53、RAS、p16／RB家族分子及相关通路上。Livin_beta是细胞内源性抗凋亡分子，对于Livin-beta及相关分子能否调控肺癌细胞中VSV

3、的促凋亡作用及其具体机制尚不清楚，我们将对这一问题展开研究。方法：利用流式细胞术、TUNEL染色测定VSV对A549细胞(肺腺癌细胞)的致凋亡作用。利用流式细胞术、DEVD酶活性检测测定VSV处理A549细胞时加或不加zVAD—fmk(caspase全抑制剂)的凋亡率和caspase一3活性。使用western_blot测定不同剂量VSV处理后A549细胞中Livin表达量的变化。在A549细胞中，通过含Livin—siRNA下调及含Livin质粒瞬时和稳定过表达Livin，利用RT—PCR、rea卜timePCR、和western-blot验证干扰或过表达Liv

4、in的效果，观察转染处理前后细胞凋亡率的变化。通过DEVD酶活性检测细胞内caspase一3的活性。通过转染含Smac—siRNA及含Smac质粒，使A549细胞内Smac表达下调或过上调，采用与转染Livin组同样方式测定VSV处理前后凋亡率的变化及caspase一3活性。利用免疫沉淀技术分析Livin与Smac的相互作用。结果：VSV促进A549细胞凋亡，并且凋亡率与VSV作用时间呈正相关。实验都以未处理组为阴性对照，顺铂处理细胞为阳性对照，P工单染后使用流式细胞仪测定凋亡，VSV处理组与未处理组比较有差异，且有统计学意义(K0．001)；A549细胞凋亡率随

5、VSV作用时间延长而增加，随感染复数加大而增加。加或不加zVAD～fmk，VSV处理组的caspase一3活性变化明显，前者caspase一3活性明显低于后者。通过western_blot检测到A549细胞泸州医学院硕士学位论文中有Livin表达，且Livin表达量随VSV剂量不同而变化，阴性对照组中Livin呈高表达，给予0．1PFU／mlVSV处理组的Livin表达量明显降低，之后随着VSV剂量增加Livin表达增加。Livin_beta表达量降低的A549细胞，加用VSV后凋亡率比阴性对照组明显增加，caspase一3活性增强；Livin—beta表达量增多

6、的A549细胞，加用VSV后凋亡率较阴性对照组减少，caspase一3活性也减弱。通过SiRNA—Smac下调Smac表达，并且Smac表达量降低的A549细胞，凋亡率减少，caspase一3活性减少。Livin高表达的细胞株中Livin与Smac结合更强。结论：A549肺癌细胞株中，Livin呐eta能通过直接或问接调控caspase分子活性改变VSV的促凋亡效应，很可能是采用与Smac结合抑制其活性的方式调控caspase的活性，这可能是导致A549细胞抗拒VSV治疗的原因之——o关键词：A549、水疱口炎病毒、凋亡、Livin、caspase、Smac泸州医

7、学院硕士学位论文】VIechanisticexplorationofinsensitiVi够oflungcancercellstoVesicularstomatitisVirus(VS、厂)treatmentAbstractobjectiVe：VesicularstomatitisVims(VSV)isapromisingbiologicaltherapy，whichinducing印optosisspecificallyintumorcells．AmajorofpreViousstudieswasfocusingontheIFNsystem、P53、BCL一1．

8、LiVin