肠癌中rspo2表达沉默的分子机制

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文答辩日期：2O14．5．23万方数据温州医科大学硕士学位论文目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．实验材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．101．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．132．实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．1肠癌组织中RsP02mRNA表达水平检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．192．2肠癌中RSP02启动子区甲基化检测分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．192．2．1肠癌细胞中RSP02表达下调的原因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．2．2RSP02启动子的CpG岛分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．202．2．3肠癌组织和细胞RSP02甲基化检测(MSP)⋯⋯⋯212．2．4肠癌细胞RSP02启动子区CpG岛甲基化程度分析(BSP、)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

3、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．：!：12．2．5肠癌组织RSP02启动子区CpG岛甲基化程度分析(BSP)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．：!：；2．3肠癌组织中RSP02拷贝数变异与表达的相关性分析⋯⋯．242．4RSP02启动子区基因突变检

4、测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．253．分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．274．，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．29参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33致谢⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯．35万方数据温州医科大学硕士学位论文缩略词表※按首字母排序3万方数据温州医科大学硕士学位论文肠癌中RSP02表达沉默的分子机制中文摘要目的R-spondin2(RSP02)作为Wnt信号通路的调节因子，被认为在肠癌的发生发展中可能发挥重要作用。我们之前的研究发现RSP02肠癌组织和细胞中表达明显下调，在大部分肠癌中RSP02发挥抑癌基因的功能，并且存在一种R-spondin2介导的LGR5依赖的Wnt信号通路负反馈调节机制。本课题将对肠癌中RSP02表达沉默的分子机制进行研究。方法1)通过反转录．实时荧光定量PCR检测肠癌组织中R

6、SP02的mRNA表达水平。2)通过生物信息学软件MethylPrimerExpressv1．0software分析RSP02基因启动子区域的CpG岛。3)通过甲基化测序PCR(BSP)和甲基化特异性PCR(MSP)检测肠癌细胞和组织中RSP02基因CpG岛的甲基化。4)通过Sanger基因测序检测肠癌组织RSP02启动区基因突变情况。5)通过TaqMan拷贝数变异分析实验检测肠癌组织基因组RSP02基因的拷贝数变化(CNV)。结果1)肠癌组织RSP02mRNA表达水平与癌旁组织相比确实出现显著下调。2)MSP结果显示9种肠癌细胞系中

7、RSP02基因均发生了甲基化修饰，对照细胞HEK293则无；76％的肠癌样本的肿瘤组织发生了甲基化修饰，癌旁组织中则少很多；BSP结果显示肠癌细胞和肠癌组织RSP02启动子区CpG位点基本全部发生甲基化，而对照HEK293细胞和癌旁组织基本没有。3)RSP02启动子区没有发生可以导致表达改变的基因突变。4)肠癌组织RSP02的拷贝数变异与RSP02表达沉默无明显相关性。结论肠癌中RSP02基因表达沉默主要是由于启动区CpG岛高甲基化所致，启动子区基因突变和拷贝数变异与RSP02表达沉默没有明显相关性。4万方数据温州医科大学硕士学位论文

8、关键词：肠癌；R-spondin．2；表观遗传；DNA甲基化；表达沉默万方数据温州医科大学硕士学位论文TheMolecularMechanismofRSP02SilencinginColorectalCancerABST