雌激素e2和内源性大麻素2-ag对人th17细胞分化影响研究

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1、DisSuISonghaoLSupervisor：SonghaoL—IUUChangshuiCHENW_eiZHANGCollegeofBiophotonicsSouthChinaNormalUniversityMay20th，2010雌激素E摘要传统上，CD4+辅助性T根据其细胞因子表达分为Thl细胞和Th2细胞，Thl细胞以表达INF吖为主要特征，IL．12通过诱导T-bet表达促进Thl细胞分化，它在细胞免疫中发挥着重要的作用；Th2细胞以表达IL．4、IL．5和IL．13为主要特征，IL．4通过诱导GATA3促进Th2

2、细胞分化，它在体液免疫过程中发挥着重要的作用。Thl7细胞是CD4+辅助性T细胞新近发现的一个皿群，以表达IL．17为主要特征。在小鼠模型中，TGF．p和IL．6是诱导Thl7细胞分化的最有效条件，人Thl7细胞分化所需条件至今还存在较大争议。Thl7细胞参与机体防御胞外菌感染、抗寄生虫免疫、介导慢性炎症、器官移植免疫排斥、自身免疫疾病和肿瘤发病等多个重要生理或病理进程。尤其是在自身免疫性疾病发病机制研究中，Thl7细胞的作用受到广泛关注；现已证明，Thl7细胞参与了类风湿性关节炎、过敏性哮喘、炎症性肠病、红斑狼疮、多发性硬化

3、症、银屑病等多种自身免疫性疾病的促炎症反应。因此，对Thl7细胞分化和功能的研究可以为与Thl7细胞相关的疾病最终攻克提供科学依据。本论文实验研究的开展主要分为三个部分：第一部分主要是建立人Thl7细胞分化模型，探讨了不同细胞冈子对人Thl7细胞分化的影响。人Thl7细胞的诱导分化条件有多种／1、=同的说法，其中包括IL．1p和IL．6联合作用、IL．1p和IL．23单独作用或联合作用、IL．2l和TGF．p联T摘要合作用等。本部分以人naiveCD4+T细胞为材料对多种可能影响人Thl7细胞分化的条件进行了探讨，利用流式细胞

4、术和RT-PCR检测细胞IL．17的表达比例和各种与Thl7细胞分化相关因子mRNA水半的表达情况。发现TGF职IL．23、IL．1p和IL．6联合作用诱导出最高比例的IL．17阳性细胞，同时此条件对与Thl7分化相关的因子的mRNA水平表达都有不同水平的促进，最终确定TGF．D、IL．23、IL．1D和IL．6是诱导人Thl7细胞分化的最优条件。该结果可为研究人Thl7细胞分化提供借鉴，为研究与人Thl7细胞有关疾病提供基础。第二部分主要探讨雌激素E2对人Thl7细胞功能的影响。多种自身免疫疾病在女性中高发，但其机制至今仍一

5、i清楚。奉部分通过纯化人外周血．单个核细胞(PBMC)，以流式细胞测定法检测其IL．17A阳性细胞率：以雌激素及其拮抗剂他莫昔芬和ICI182．780处理PBMC后，以荧光实时定量PCR检测其晕要冈子mRNA表达水平。结果表明所检测个体的PBMC中，lL．17A阳性细胞率介于0．2％～1．5％。低水平E2(1nM)和高水平E2(100nM)显著抑制IL．17A和IL．17F的合成，而中等水平E2(10nM)抑制效应4i明显；两个拮抗剂均未产生相应的拮抗作用。E2对ERa、ERl3、RORyt、RORa和IL．23R表达的影响彳

6、i明显。E2抑制效应的量效关系提示，雌激素水平较低或很高的个体(如男性或妊娠期女性)，其Thl7细胞功能可z日-．匕／

7、匕-、-太活跃；反之，雌激素水平相对较高的个体(如女性)，其Thl7细胞功能相对活跃；该结果部分解释了多种自身免疫疾病的雌性偏向。第三部分主要探讨内源性大麻素2-AG对人Thl7功能的影响。大量研究表明大麻素类物质对Thl和Th2功能有影响，对人Thl7功能是含有影响至今未见报道。本部分通过纯化人外周血单个核细胞(PBMC)，以流式细胞测定法检测其IL．17A阳性细胞率；2-AG及其拮抗剂AM251和AM63

8、0处理PBMC后，以荧光实时定量PCR榆测其蕈要冈子mRNA表达水半。结果表明低剂量2-AG(O．29M)显著促进，高剂量2-AG(201aM)显著抑制IL．17AmRNA水平，而21aM2-AG对IL．17A表达抑制效应彳i明显：两个拮抗剂均未产生相应的拮抗作用。2-AG对CBl、CB2、ROR'tt、RORot和IL．23R表达的影响卅i明显。说明1i同浓度2-AG对人Thl7细胞功能有4i同的影响，低浓度促进高浓度抑制Thl7细胞的功能。同时说明高浓度的抑制作用没有通过大麻素经典受体CBl和CB2。摘要关键词：辅助性T细

9、胞，白介素17，外周血单个核细胞，雌二醇，他莫昔芬，2．AG，AM25l，AM63ABSTRACTClassicabasisoftheircytokine-expressionprofiles．Thlcellsdevelopinresponsetointerleukin12(