资源描述：
《大麻素win55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞前列腺素e2表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞前列腺素E2表达的影响【摘要】目的研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞前列腺素E2(PGE2)表达的影响,从而探讨其降眼压机制。方法采用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代培养,取传3代的细胞运用酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后细胞上清液中PGE2水平的变化;运用RT-PCR方法检测不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后PGE2mRNA在小梁细胞内的表达水平。结果细胞上清液中的PGE2水平与细胞内PGE2mRNA水平随大麻素浓度变化呈剂量依赖性升高。结论一定剂量的大麻素
2、可以促进小梁细胞分泌PGE2,从而达到降低眼压的目的。【关键词】大麻素WIN55,212-2;小梁细胞;前列腺素E2;前列腺素E2mRNA Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofWIN55,212-2ontheexpressionofPGE2inculturedbovinetrabecularmeshworkcells(TMCs)anddiscussitsmechanismofreducingtheintraocularpressure.MethodsTMCswereobtainedthroughtheculturedtissue,bovineT
3、MCswereprmiarilyculturedandsubcultured.ThethirdgenerationbovineTMCswereincubatedwithdifferentdosagesofWIN55,212-2andthesupernatantwas9collected.TheconcentrationofPGE2inthemediumwasmeasuredbyELISAmethod.PGE2mRNAinTMCswasanalyzedbyRT-PCR.ResultPGE2inthesupernatantandPGE2mRNAinTMCsincreaseddepend
4、ingonthedosagesofWIN55,212-2.ConclusionCertainconcentrationofWIN55,212-2maypromotePGE2secretionofTMCs,soastoreducetheintraocularpressure. Keywords：WIN55,212-2;trabecularmeshworkcell;PGE2;PGE2mRNA 大麻素是包括从大麻植物中提取的、人工合成的以及存在于动物体内的内源性大麻素样物质在内的一类具有生物学活性的物质,很早以前就有使用大麻素的天然提取物治疗疼痛、精神病、破伤风等疾病的记载[1]。近
5、年的研究表明,大麻素WIN55,212-2局部应用具有明显的降低眼压作用[2],而内源性的大麻素N-花生四氢酸氨基乙醇(anandamide,AEA)已经被证实可以促进前列腺素(PG)生成从而起到降低眼压的作用[3]。但目前大麻素WIN55,212-2的降眼压机制尚不清楚。为此,本实验选用大麻素WIN55,212-2作用于牛眼小梁细胞,运用酶联免疫吸附(ELISA)、RT-PCR方法检测不同浓度的大麻素作用后小梁细胞上清液中前列腺素E2(PGE2)水平及小梁细胞内PGE2mRNA表达水平的变化,探讨大麻素WIN55,212-2的降低眼压机制。9 1实验材料 1.1主要试剂及药物
6、 大麻素WIN55,212-2及TocrisolveTM100溶剂(上海优宁维生物科技有限公司),胎牛血清(杭州四季青生物工程公司),神经元烯醇化酶(NSE)、波形蛋白及第Ⅷ因子相关抗原、PGE2-ELISA试剂盒(美国R&D公司)。 1.2标本的采集 牛眼4只(出生24h内的小牛处死后于4h内取小梁组织)。 2实验方法 2.1体外牛眼小梁细胞的培养 参考文献[4]细胞培养方法,牛眼用0.1%新洁尔灭、自来水和60%酒精冲洗消毒后置于无菌D-Hank’s中,在超净工作台中剪除角巩膜缘后3～5mm的球后组织,分离眼前节,保留完整虹膜组织,置于含少量D-Hank’s
7、液的无菌培养皿中,在体视显微镜下分离小梁组织(乳白色疏松网状组织)。将组织块在无菌D-Hank’9s中漂洗3次后,用含青霉素500U/mL和链霉素500U/mL的生理盐水浸泡消毒3次,然后用眼科剪将其剪成1mm大小的碎块并将其移入培养瓶,组织块间距为3～5mm。将培养瓶倒置放于CO2恒温培养箱,加入高糖型DMEM培养液12h后翻转培养瓶。每3d更换培养液,待细胞长满约80%培养瓶底时以1/2方式传代。显微镜观察细胞生长特性及形态特征,从形态学角度初步鉴定细胞。 2.
