人眼小梁组织及体外培养的人眼小梁细胞SPARCmRNA及其蛋白表达

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1、人眼小梁组织及体外培养的人眼小梁细胞SPARCmRNA及其蛋白表达【关键词】人眼　　ExpressionofSPARCmRNAandSPARCproteininhumantrabecularmeshworkandculturedhumantrabecularmeshworkcellsinvitro　　【Abstract】AIM:Toinvestigatewhethersecretedproteinacidicrichincysteine（SPARC)andSPARCmRNAareexpressedinh

2、umantrabecularmeshwork（TM）andculturedhumantrabecularmeshworkcells（TMCs）andtoexploretherolesofSPARCproteininthepathogenesisofprimaryopenangleglaucoma(POAG).METHODS:RTPCRandWesternBlotwereusedtodetectSPARCmRNAandSPARCproteinandimmunofluorescencestainingofc

3、ulturedTMCswasperformedbyantiSPARCantibody.RESULTS:RTPCRofTMandTMCsusingSPARCspecificprimersoftheRNAdisplayedthepresenceofthepredictedbandofapproximately300bp.WesternBlotshowedaproteinbandof43Ku.CONCLUSION:HumanTMandTMCscanexpressSPARCmRNAanditscorrelati

4、veprotein,whichinfluencestheaccumulationanddegradationofextracellularmatrix.9　　【Keywords】trabecularmeshwork；trabecularmeshworkcells；secretedproteinacidicrichincysteine；extracellularmatrix；primaryopenangleglaucoma　　【摘要】目的：研究人眼小梁组织（TM）及体外培养的人眼小梁细胞（TMCs）是否可

5、以表达酸性富含胱氨酸分泌型蛋白（SPARC)mRNA及SPARC蛋白.探讨SPARC蛋白在原发性开角型青光眼（POAG）发病机制中的作用.方法：分别采用RTPCR和WesternBlot方法，对小梁组织和细胞进行检测，用抗SPARC蛋白免疫荧光染色方法对细胞进行染色.结果：组织和细胞RTPCR均在300bp处出现预期的电泳条带，组织和细胞WesternBlot在Mr为43×103处出现蛋白条带.TMCs抗SPARC免疫荧光染色表现为胞质均匀着色.结论：TM组织及体外培养的人眼TMCs均可表达SPARCm

6、RNA及其相关蛋白，并起着调节细胞外基质（ECM）的生成和降解作用.　　【关键词】小梁组织；小梁细胞；酸性富含胱氨酸分泌型蛋白；细胞外基质；原发性开角型青光眼　　0引言　　小梁网（trabecularmeshwork,9TM）临管区的邻管组织（juxtacanaliculartissue,JCT）是形成房水流出阻力的重要部位，它是由小梁细胞（trabecularmeshworkcells,TMCs）和细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）组成的无定型组织层.ECM在细胞外的表达处于

7、持续的重塑状态.其合成和降解是调节房水流出阻力的一个重要环节［1］.研究表明酸性富含胱氨酸分泌型蛋白（secretedproteinacidicrichincysteine，SPARC）在调节ECM的合成和降解中起着重要的作用.它是一种细胞外基质相关糖蛋白的调节蛋白，又称为骨连蛋白，由3个结构域组成，Mr为43×103.在多种组织中都发现了SPARC基因和其相关蛋白的表达，并起着调节细胞黏附、增殖、ECM的合成/转化以及ECM与细胞连接的作用［2］.我们研究人眼TM组织和体外培养的人眼TMCs是否表达S

8、PARCmRNA及其相应的SPARC蛋白，以进一步探讨改善房水流出、调节眼压（intraocularpressure,IOP）的机制以及原发性开角型青光眼（primaryopenangleglaucoma,POAG）的发病机制.　　1材料和方法　　1.1材料　　DMEM培养基、Trizol总RNA提取试剂盒、RTPCR试剂盒、Taq酶均购自Gibico公司;BCA蛋白定量试剂盒（Pierce公司）；羊抗人SPARCpAb（Santa9Gru