白细胞介素1α对培养的人眼小梁细胞的影响

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1、华中科技大学硕士学位论文白细胞介素-1α对培养的人眼小梁细胞的影响姓名：吴超琼申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：丁正平;胡义珍2003.4.1兰!塑垫盔兰型塑匹堂堕堡土堂生!i墨白细胞介素．1CI．对培养的人Itl／d,梁细胞的影响华中科技人学同济医学院附属协和医院R7弦、多硕士研究生：吴超琼导师：Jll三平教授胡义珍教授摘要目的：观察白细胞介素．1o(intefleukin．1Q，1L．1d)对体外培养的人眼小梁细胞(Humantrabecularmeshworkcell，HTC)的影响，了解在炎壅

2、丝叁壹盘腿中炎症因子的作用机制。，f方法：人眼小梁细胞的体外培养采用组织块培养法。．Mlt§4,梁细胞原代和L传代培养，取传3代的人小梁细胞行免疫组化ABC染色，检测细胞外基质包括纤维连接蛋白(Fn)和层粘连蛋白(Ln)。取传3-5代的人小粱细胞，加入不同浓度的IL一1Ⅱ的DMEM／F12液(0．5ng／ml、lng／ml、5ng／nal、10ng／ml、50ng／ml、100ng／m1、200ng／m1)，通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测IL一1a对培养的人小梁细胞增殖的影响；用倒置相差显微镜、光

3、镜、和电镜观察细胞形态结构及吞噬功能的变化。膨／结果：(1)根据培养细胞的生长特性，形态特征及细胞外基质(Fn和Ln)染色特点等确定培养的细胞为人眼小梁细胞。(2)MTT测定法：阴性对照组与低浓度实验组(0．5ng／ml，lng／m1)相比，吸光度值无显著差异(P>0．05)IL一1o浓度一>5nWml各实验组与对照组相比，吸光度值有显著差异(P<0．05)(3)与对照组比较，0．5ng／ml浓度的IL．1o对人11艮d,梁细胞形态结构及吞噬功能差异无显著性；1ng／ml24小时细胞吞噬功能有轻度下降；IL

4、一1。年中科技大学川济医学院帧1‘学位论文。浓度进一步增加，作用时间延长，细胞的损伤也加重。结论：人眼小梁细胞只能承受一定浓度范围的IL一1o：IL．1Q浓度／>5ng／ml时，将破坏细胞形态结构并影响其功能，而且显著抑制体外培养的人小梁细胞的增殖。关键词：人小梁细胞白细胞介素．1o炎症因子21#中科技人学l川济医学院埘j。学位论义AbstractObjective。Toobservetheeffectsofinterleukin一1a(IL一1o)onculturedhumantrabecularmesh

5、workcells(HTCs)andunderstandthefunctionmechanismsofinflammatorycytokinesinsecondaryglaucomacausedbyinflammation．Methods：Thecultivationofhumantrabecularmeshworkcellsusetissudculture．HTCswereprimarilyculturecandsubcultured．ThethirdpassageofcellswereusedFibro

6、nectin(Fn)andLamin(Ln)inextracellularnqatrixwereimmunohistochenicallystainedbyABCmethod．Thethird—fifthpassageofHTCweretreatedwithdifferentconcentrationsofIL．1OinDMEM／F12medium(O．5ng／ml、lng／ml、5ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml、200ng／m1)．MTTassaywasusedtodetec

7、ttheeffectoftheproliferation．Cellularmorphoiogyandphagocyticfunctionwereobservedunderinvertedphase—contrastmictoscopelightmicroscopeandelectronmicroscope．Results：(1)Accordingtogrowthcharacteristics、morphologyfeaturesandstainfeaturesofextracellularmatrixdet

8、erminecellsculturedarehumantrabularmeshworkcells．(2)MTTassay：TherewerenosignigieantdifferenceofproliferationinhibitionoropticaldensitybetweenthecontrolgroupsandgroupstreatedwithIL一1oatlowerconcentration(0．5ng