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1、大麻素WIN55,212【摘要】目的研究大麻素ethodsTMCsiarilyculturedandsubcultured.ThethirdgenerationbovineTMCsediumeasuredbyELISAmethod.PGE2mRNAinTMCsRNAinTMCsincreaseddependingonthedosagesofCs,soastoreducetheintraocularpressure. KeyeshRNA 大麻素是包括从大麻植物中提取的、人工合成的以及存在于动物体内的内源性大麻素样物质在内的一类具有生物学活性的物质,很早以前就有使
2、用大麻素的天然提取物治疗疼痛、精神病、破伤风等疾病的记载[1]。近年的研究表明,大麻素100溶剂(上海优宁维生物科技有限公司),胎牛血清(杭州四季青生物工程公司),神经元烯醇化酶(NSE)、波形蛋白及第Ⅷ因子相关抗原、PGE2-ELISA试剂盒(美国RD公司)。 1.2标本的采集 牛眼4只(出生24h内的小牛处死后于4h内取小梁组织)。 2实验方法 2.1体外牛眼小梁细胞的培养 A。以获得的cDNA为模板,PCR扩增目的基因。扩增条件：94℃变性,20s。58℃退火,20s。72℃引物延伸,20s。32次循环。根据牛的PGE2mRNA序列(Geneban
3、kAccessionNumber：XP_599033.2)设计引物。PGE2引物序列：上游序列5’-agtgagctgagcctcgtgat-3’,下游序列5’-gcagcagacgtccagtgtta-3’,扩增后片段长度为195bp。内参β-actin上游序列5’-ctcttccagccttccttcct-3’,下游序列5’-gggcagtgatctctttctgc-3’,扩增后片段长度为178bp。最后,各取5?LPCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶中电泳,DNAMarker长度分别为100、250、500、750、1000、 2000bp。 3统计学方法
4、所有数据应用SPSS12.0统计软件处理,计量资料结果以—(—资)±s表示,多个样本均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,P<0.05认为有统计学意义。 4结果 4.1小梁细胞上清液中前列腺素E2检测结果(见表1)表1大麻素)及细胞之间的粘附性以及细胞骨架结构均参与房水外流的调节,并不同程度地影响眼压值的变化。ECM的降解以及细胞间粘附性的下降会增加房水外流的通畅性。 本实验通过对基因和蛋白两个水平的检测均证实大麻素MP),造成睫状肌松弛,肌间隙增宽;同时MMP活性增加可降解ECM,导致房水经巩膜-葡萄膜通道的外流增加和眼压的降低[6
5、-7]。PGE2有4种受体,分别为EP1、EP2、EP3、EP4。有研究发现,有些PGE2(如比马前列腺素及乌诺前列酮)也可能是通过作用于传统房水流出通道(小梁网通道)来降低眼压的[8]。 我们通过相差倒置显微镜观察,发现随着大麻素浓度的升高,牛眼小梁细胞变圆,细胞连接减少,细胞间隙扩大并呈浓度依赖性。我们推测,大麻素连接粘附等功能密切相关的细胞骨架结构来发挥作用的。小梁细胞骨架改变可以使整个小梁通道的整体结构发生改变,从而使潜在的房水排出通道开放,增加房水外流。 本实验从PGE2的角度对大麻素S,ChoHS,YangSJ,etal.Efficacyoflat
6、anoprostinpatientsinarystudy[J].JOculPharmacolTher,2005,21(1)：75-84. [8]王宁利,梁远波,乔利亚,等.拉坦前列腺素降眼压作用与小梁网房水排出途径的关系探讨[J].中华眼科杂志,2006,42(14)：341-343.
