mir--98促进肝癌发生发展机制初步研究

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1、南方医科大学2011级硕士学位论文miR-98促进肝癌发生发展机制初步研究ThepreliminaryresearchonthemechanismofHsa-miR-98intheoccurrenceanddevelopmentofhepaticcarcinoma课题来源：国家自然科学基金资助项目(No．81272407)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院何涵李凌副教授流行病与卫生统计学学术型硕士研究生公共卫生与热带医学学院2014年05月20日广州㈣Y2㈣6t㈣76㈣74硕士学位论文miR-98促进肝癌发生发展机

2、制初步研究硕士研究生：何涵指导教师：李凌副教授摘要一、研究背景和目的肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是全球高发的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类生命健康，肝癌病因尚未明确，早期无明显症状，容易发生转移，这些是导致其预后差，病死率居高不下的重要因素。肝癌的发生发展是一个多阶段、多步骤、多因素的复杂过程，近年来，一些重要的信号通路在肝癌发生发展中的作用得以阐明，然而，肝癌早期诊断难，晚期治疗效果差的现状仍然没有被改变。因此，深入理解肝癌发生发展的分子机制，寻找新的诊治靶点迫在眉睫。microRNAs(m

3、iRNAs)是一类内源性非编码小分子RNA，长约19—25个核苷酸(nucleotide，nt)，通过结合靶基因mRNA的3’非翻译区(3’untranslatedregion，3’一UTR)，阻遏靶基因的翻译，从而抑制基因表达。miRNA参与动植物的组织器官发育、细胞分化和凋亡、胰岛素分泌、脂肪代谢等生命活动，在许多病理过程包括癌症发生及癌细胞转移中扮演重要的角色。miRNAs作为一类新型的调节因子，既可以作为原癌基因发挥作用，也可以作为抑癌基因调节细胞的生物学特性。目前为止，已发现多个发挥原癌基因或肿瘤抑制基因作用的miRNA

4、s，如miR-i7—92cluster、let-?、miR-143、miR-21和miR-373、miR-145、miR-372以及miR-98等，它们通过调控下游靶基因的转录和翻译参与了肿瘤的演进过程。I中文摘要肝癌的发生机制比较复杂，目前研究发现染色体突变、表观遗传、非编码RNA基因的突变及蛋白编码基因突变等均与肝癌的发生发展密切相关。尽管在肝癌中发现了许多癌基因和肿瘤抑制基因，{．旦microRNA小分子在肝癌生物学中的功能则是近几年来才被开始关注。miRNA在肝细胞癌发生过程中的功能以及与肝细胞癌诊断、治疗的关系是目前备受

5、关注的课题之一，与肝细胞癌发生发展相关的miRNA研究证实有很多，女OmiR一23a、miR一27a、miR-223、miR一21、miR一221及miR-17-92等，它们可以通过抑制或促进相关癌相关基因的表达而发挥重要的作用。由此可见，miRNAs调节HCC发生发展的分子机制研究可能为肝癌的早期诊断和治疗提供一种新的途径。Hsa—miR-98(miR-98)首先从Hela细胞中克隆得到，全长2Int，在多种组织中泛表达，无组织特异性。miR-98的表达失调参与了多种肿瘤的发生发展和侵袭转移，如肺癌、乳腺癌和结肠癌等。miR一9

6、8家族是一个高度保守的微小RNA家族，可以调控RAS、MYC、HMGA2、CDC25A、CDK6等靶基因，与生命中的多种生物学现象和生理过程息息相关，特别是在细胞增殖与分化以及肿瘤相关方面的作用尤为突出。人体内let-7／miR-98家族成员表达失调参与一些疾病的发生发展，比如miR-98异常表达在乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌中起了一定的作用。还有研究表明，miR-98通过Fas家族可以直接作用于Fas基因的3’一UTR区域，调节Fas基因的表达，并影响Fas介导的细胞凋亡，miR一98在SCI型细胞中低表达，在SCII型细胞中高表达

7、，这与miR-98负向调节Fas是一致的。成熟的miRNA可以与其他蛋白质一起组成RISC(RNA-inducedsilencingcomplex)复合体，通过核酸序列互补与靶基因mRNA的作用，miRNA主要是在数量上对靶基因进行调节作用。这展示了miRNA在临床应用方面的巨大前景。但是miR一98和肝癌的关系尚未报道，我们前期结果提示miR-98在肝癌组织中表达明显高于正常对照组。本课题的研究目的为鉴定miR-98在肝癌细胞和组织中的表达特性，然后通过改变miR-98的表达水平观察对于肝癌细胞生物学特性的影响，最后结合生物信息

8、学预测和分析其靶基因，阐明miR-98在肝癌发病机制中所扮演的角色，为深入理解肝癌发病的分子机制和寻找新的分子靶向治疗靶点奠定理论基础。TT硕士学位论文二、研究方法1．荧光定量PCR方法检测肝癌组织、正常肝组织及肝癌细胞株中miR一98的表达取已裂