hiwi基因在肝癌发生中的机制研究

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1、分类号：Ｒ３４单位代码：１０６７８！学号；２０１２０２５巧级見略Ｓ种Ａ常硕±学位论义Ｈｉｗｉ基因在肝痛发生中的化制研究院（系）所昆巧民科大学基础医学院硏究生姓名刘并学科、专业橘巧堂与病巧牛学学位类型科學学位巧导教师童宗德救授二〇—五年五月尾４ｉｌ种欠常硕±学位论文Ｈｉｗｉ基因在肝癌发生中的机制研究研巧生姓名刘弁学科、专业病巧学与病理生理学申请学位类型科学学化指导教师章宗籍教授指导小组教师宰瞧敎授完成日期二Ｑ—五年五月筵跨ｉ种於聲研究生学位絶文研宛撰写声明

2、本人郑重声明：本学位论文是我本人在导师指导下，独立进行学位课题研究所取得的研究成果。论文中除特别加Ｗ标注和致谢的地方外，不包含他人或其他机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研巧和论文做过贡献的同道我均在论文中作了明确的说明并表明谢意，。该学位论文资料若有不实之处本人愿承担一切相关责任。）论文作者（签名：分ｉＴ年６月Ｉ曰堯种欠掌研巧生学位论文版权使用授权书、本学位论文作者完全了解昆明医科大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部ｎ或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可公布论文的全部或部分

3、内容（确属保密内容已注明，并在解密后遵守此规定）；学校可采用影印、缩印或其他手段保存本学位论文。学位论文作者））（签名指导教师嚇■玉年６月ｆ日心。年／月Ｉ日＂本人及导师同意将学位论文提交至清华大学中国学术期刊（光盘版）电’’子杂志社进行电子和网络出版，并编入ＣＮＫＩ系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。＇—＾学位论文作者（签名）：ｙ：）指导教师（签名）—年＾月）曰心（Ｊ年Ｉ？月曰ｆ目录一、中文摘要１二、英文摘要３Ｈ、论文６６

4、前ａ材料和方法８实验材料８实验方法１２鄉２５３８结４３参考文献４４综述４８一５５附录：缩略词表附录二；攻读学位期间发表文章情况５６ａ：ｍ５７昆明医科大学硕±研巧生学位论文Ｈｉｗｉ基因在肝癌发生中的机制研巧硕壬生：刘巧导师：章宗籍教授指导教师：李瞧教授中文摘要一ｉｗｉ，又称为ＰｌｌＰｉｗｉｉｗｉ目的：Ｈ蛋白ｉｗｉ蛋白，是人类蛋白家族中的员。Ｈ基因己被报道在食管癌、胃癌、膜腺癌、肝癌等多种癌症组织中表达增高，但在肝癌中Ｈｉｗｉ的表达改变是巧癌发生的原因还是结果目

5、前并不明确。本研巧着重探讨陆ｗｉ基因对肝癌细胞的増殖、迁移和稠ｔ的影响，并对其作用的分子机制进行初步探索。方法：１．首先克隆人陆ｗｉ基因，构建了曲ｗｉ表达质粒。巧Ｈｉｗｉ表达质粒及对照质粒转染人肝癌ＨｅｐＧ２细胞株。采用ＭＴＴ实验检测细胞活性变化，破化丙惦染色方法进行细胞周期分析，同时通过Ｅｄｕ染色鉴定细胞增殖。采用ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移实验检测ＨｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｉｗｉ对细胞迁移能力的影响。采用ｒ的方法检测了ＥＭＴ相关基因的ｍＲＮＡ表达水平。２．建立了小鼠原代肝细胞的培养，构建了带有ＧＦＰ标记的表达人Ｈｉｗｉ的重姐腺病毒，感染

6、ＨｅｐＧ２细胞和原代肝细胞，再用ｐｅｒｉｆｏｒｓｉｎｅ或对乙酷氨基酪（ＡＰＡＰ）诱导细胞调ｔ采用ＭＴＴ方法检测细胞活性变化同时对ＡＰＡＰ处理的ＨｅｐＧ２细胞进行ＴＵＮＥＬ染色鉴定细胞调亡情况。３．通过小鼠尾静脉注射腺病毒构建巧脏过表达Ｈｉｗｉ的在体模型，病毒注射后５ｄ检测肝脏组织中Ｈｉｗｉ的表达、调亡相关基因和ＥＭＴ相关基因的ｍＲＮＡ水平。小鼠尾静脉注射腺病毒后，再腹腔注射ＡＰＡＰ建立急性肝损伤模型，检测Ｈｉｗｉ的表达对ＡＰＡＰ引起的小鼠肝损伤的影响，同时检测过表达Ｈｉｗｉ的小鼠肝脏和原代肝细胞中ＤＮＡ甲基化的水平。；１．成功克隆了人Ｈｉ

7、ｗ结果ｉ基因，构建了Ｈｉｗｉ表达质粒和腺病毒。通过ＭＴＴ、细胞周期检测和ＥｄＵ标记方法，发现陆ｗｉ基因的表达不能促进ＨｅｐＧ２肝１昆明医科大学硕±研巧生学位论文癌纯胞和原代肝细胞的增殖。过表达陆ｗｉ细胞的迁移能力和上皮细胞向间质细胞的转化（ＥＭＴ）相关基因的表达也无明显改变。２．我们观察了Ｈｉｗｉ的表达对肝细胞调亡的影响，发现陆ｗｉ对ｐｅｒｉｆｏｒｓｉｎｅ或对乙酷氨基敢（ＡＰＡＰ）诱导的细胞调亡无抑制作用。３．成功构建了Ｈ，ｉｗｉ表达的腺病毒用尾静脉注入腺病毒方法建立了肝脏高表达Ｈｉｗｉ的小鼠