mir-301a促进胃癌发生发展及其作用机制的研究论文

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1、IYIIIIIIl2llUU3lllll5lllll恻568帆Y2351miR-301a促进胃癌发生发展及其作用机制的研究StudyonthefunctionandmechanismofmiR-301aintheCarCinOgeneSiSanddevelopmentofgastriccancer研究生姓名王明学号0097209110指导教师刘炳亚教授导师组成员朱正纲教授顾琴龙教授燕敏教授苏丽萍副教授学科(专业)外科学(普通外科)研究方向胃癌的基础与临床研究申请学位级别医学博士培养单位上海交通大学医学院附属瑞金医院

2、论文提交日期2012年4月基金项目：本课题受到国家自然科学基金(81172324)；教育部高等学校博士学科点专项科研基金(博导类)(20110073110071)；上海市教育委员会科研创新重点项目(12ZZl05)以及上海交通大学医学院博士创新基金项目(BXJ201115)资助。上海交通人学博，L学位论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做

3、出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：工稍＼日期：护／哗r月夕日上海交通人学博十学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电了版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将木学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口

4、。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名：咐舯撕虢荔。水砂日期：Ⅵ／。年，月9日日期：脚／砂年厂月夕13上海交通大学博

5、1：学位论文miR-301a促进胃癌发生发展及其作用机制的研究摘要【目的】胃痛是我国最为常见的恶性肿瘤之一，并且以进展期胃痛为主。外科手术是目前治疗胃痛的有效手段，但进展期胃痛患者的术后5年生存率较差。以上根本原因在于胃癌的发病机制未明。miRNA是一类新近发现的内源性非编码小分予RNA，它们不仅调控众多正常的生理功能，而且在肿瘤的发生和发展巾发挥重要作用。由于miRNA在胃痛巾的作用尚未被完

6、伞阐明，我们通过微阵列技术筛选出一系列在胃痛与正常对照差异表达的miRNA，而miR．301a是其中差异最显著的之一。木课题主要目的在于探讨miR．301a在胃癌巾的表达和功能，并探索其调控机制。【材料与方法】(1)应用qRT-PCR对前期microRNA微阵列筛选出的miR．301a在九株胃痛细胞株与永生化胃黏膜细胞GES．1和正常胃黏膜组织rfl的表达水平进行验证，检测其在51对配对的胃痛肿瘤组织与痛旁组织巾的表达水平，并进一步分析胃痛组织中miR-301a表达水平与胃痛临床病理特征之间的关系；(2)采用miR

7、．301amimics与miR．301a逆转录病毒表达载体上调胃癌细胞株SGC．7901巾miR-301a的表达水平，以及miR一301ainhibitors下调该细胞株miR一301a的表达水平，观察其对胃癌细胞生物学行为的影响；(3)生物信息学预测靶基因，然后结合3’UTR双荧光素酶报告系统检测，qRT-PCR和免疫印迹的方法，筛选并验证miR．301a作用的靶基因，初步明确miR．301a的发挥生物学功能的分子机制。【结果】qRT-PCR检测结果显示，miR．301a在胃癌细胞株中的表达水平明显高于其在GES

8、．1和正常胃黏膜组织中的表达水平，与microRNA微阵列中的检测结果趋势相一致。miR．301a在51例胃痛组织中的平均表达水平显著高于其配对癌旁组织，且胃癌组织miR-301a表达水平越高者，肿瘤组织分化程度越差。上调miR-301a表达水平能有效增强胃癌细胞株SGC．7901体外增殖、克隆形成、迁移侵袭及体内上海交通大学博Ij学似论文成瘤能力，抑制凋亡，下调miR一301a除了逆转上述生物学行为，还诱导细胞周期发生G2／M期阻滞。生物信息学分析提示转录因-了RUNX3的mRNA的3’UTR含有miR．301a

9、直接作用的种予序列，双荧光素酶报告系统检测进一步证实了该靶序列，qRT-PCR及Immunoblot证实miR-301a对RUNX3蛋白表达的调控发生在转录后水平。【结论】miR-301a在胃癌细胞和组织巾处于高表达状态，其表达水平与肿痛组织分化负相关；上调miR．301a表达水平能增强胃痛细胞的恶性表型，反之亦然；miR-301a通过对其靶基因RUNX3的