14-3-3ε与rkip相互作用对胃癌发生发展的影响及其机制研究

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1、中图分类号UDCR57610博士学位论文学校代码密级1053314．3．3￡与RKIP相互作用对胃癌发生发展的影响及其机制研究Thmechanihofprotein"teractionemecIianismresearcoIproteininteractionlnbetween14—3—3￡andRKIPonthedevelopmentofgastriccancer作者姓名：严璐学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：张桂英教授中南大学二零一三年五月一令一二，平血月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进

2、行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：轧日期：扯年!朗生日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本

3、学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：鸵导师签名越日期：缴翊鲫博士学位论文中文摘要摘要14．3．3￡与RKIP相互作用对胃癌发生发展的影响及其机制研究研究背景胃癌(gastriccancer，GC)是我国人群中常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于肺癌居第二位【11，也是目前世界上发病率第四位的肿瘤，居消化道恶性肿瘤发病率及病死率第一位口1，是当前危害人民身体健康的重大疾病。胃癌的发生发展是一个多因素、多阶段和多基因参与的复杂病理过程【31，其发病机制仍然不明确。寻找新的肿瘤标志物及基因治疗靶点，阐明胃癌

4、的发生发展机制，对其早期诊治有重要作用。我们前期应用激光捕获显微切割(Lasercapturemicrodissection，LCM)技术联合180稳定同位素标记定量蛋白质组学技术对胃腺癌的蛋白质组进行研究，构建了胃腺癌差异表达蛋白质谱，首次发现Raf激酶抑制蛋白(Rafkinaseinhibitorprotein，RKIP)在正常胃粘膜组织中高表达，在胃癌组织中明显下调[41。通过临床研究发现RKIP蛋白表达与胃癌的发生发展和肿瘤分化有密切的关系碡1。并在此工作基础上，应用亲和纯化偶联质谱技术为主的靶向蛋白质组学，鉴定出SGC7901胃癌细胞中7

5、2个RKIP相互作用蛋白质，并筛选出包括14-3．3￡在内的与RKIP抑制肿瘤发生发展作用相关的特异性蛋白同。本课题受国家自然科学基金(No．81072038)项目资助。博士学位论文中文摘要14．3．3蛋白家族是一组胞质内酸性蛋白质，有强大的蛋白结合能力及多样化的功能，主要通过与其它蛋白相结合来发挥其独特的作用同。研究表明14。3．3蛋白与癌症的发生和发展密切相关，主要通过调节肿瘤细胞生长、扩散迁移、细胞周期、细胞凋亡及信号转导通路等参与肿瘤的发生发展【81。随着生命科学研究的不断发展，人们逐渐意识到蛋白质作为细胞生命活动的重要执行者和调控者，其功

6、能的发挥并非仅凭借单个蛋白质独立执行，而是依靠蛋白质与蛋白质相互作用(protein．proteininteraction，PPI)执行其功能‘91。因此，本研究在前期研究的基础上，应用免疫共沉淀、三维免疫荧光共定位等技术，验证14．3．3蛋白家族中￡亚型与RKIP蛋白在胃癌中存在相互作用，并研究两者相互作用对胃癌细胞增殖、侵袭能力的影响及其机制；并初步探讨了14．3．3￡促进胃癌发生发展的分子机理，为胃癌的早期诊断、预后监测及基因治疗提供了理论依据和新的线索。第一章14．3．3￡与RKIP在胃癌中的相互作用及其机制研究目的：验证蛋白RKIP与14

7、．3．3￡之间存在相互作用，探讨两者相互作用对胃癌细胞增殖、侵袭迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法：①在胃癌SGC7901中转染质粒pcDNA3．1．PEBPl和(或)质粒pcDNA3．1一YWHAE—HA，用含G418400ug／ml的选择培III博士学位论文中文摘要养基进行筛选，构建稳定表达RKIP和(或)14．3．3￡蛋白的胃癌SGC7901细胞株；②采用双向免疫共沉淀、三维免疫荧光共定位的实验方法验证RKIP与14．3．3￡之间的相互作用；③应用MTT法检测各组细胞的增殖能力，transweU小室实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力；④应用

8、Westernblotting方法分别检测磷酸化ERK(p—ERK)与totalERK、磷酸化RKIP(p-RKIP)与t