cmbzip-like和cmapp基因在盾壳霉发育和产孢过程中的功能分析

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1、华中农业大学硕士学位论文CmbZIP--like和CmAPP基因在盾壳霉发育和产孢过程中的功能分析姓名：徐伟华申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：姜道宏201206CmbZIP-like和CmAPP基因在盾壳霉发育和产孢过程中的功能分析摘要盾壳霉(Coniothyriumminitans)是核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)的重寄生真菌，对作物菌核病有显著控制作用。分生孢子是盾壳霉存活、寄生和传播的主要形式，同时也是盾壳霉生防制剂的主要成分，在盾壳霉生长发育的重要环节

2、起重要作用。研究和理解盾壳霉分生孢子形成的调控信号具有重要的理论意义和实践价值。本文以盾壳霉ZS．1菌株T．DNA插入标记的产孢缺陷型突变体ZS．1T11329和ZS．1T21656为材料，对它们的生物学性状和分子生物学性状进行了系统的研究，结果如下：突变体ZS一1T11329在PDA上不能产生分生孢子器，生长速度明显快于ZS—l，菌丝分支增多，寄生致腐核盘菌菌丝、菌核能力有所下降，核盘菌菌丝、菌核不能恢复其产孢性状，但是部分突变体如ZS．1T21656可以恢复其产孢，产生的分生孢子与ZS．1孢子

3、的形态一致，能够正常萌发生长，证明ZS．1T11329的产孢可以恢复。突变体ZS．1T21656不能产生分生孢子器：菌丝尖端弯曲，分支短而多；生长速度、寄生致腐菌核能力与ZS．1无明显差异；寄生核盘菌菌丝能力下降，产抗真菌物质能力增强。Southern杂交证实T-DNA标记在突变体ZS．1T11329和ZS．1T21656中均为单拷贝插入。突变体ZS一1T11329中T-DNA插入在一编码区为793bp的基因的启动子区域，该基因的推定蛋白与碱性亮氨酸拉链(bZIP)转录因子蛋白具有同源性，故将其基

4、因命名为CmbZIP-like；突变体ZS．1T21656中T-DNA插入在一编码区1993bp的基因的启动子区域，该基因的推定蛋白与氨酰基脯氨肽酶具有高度同源性，并含有其保守结构域APP，故命名基因为CmAPP。CmbZIP．，妇和C，州胛基因在ZS．1基因组内均为单拷贝。利用敲除、互补的方法，农杆菌介导转化(ATMT)技术对以上基因的功能进行了研究。构建了CmbZIP-like基因和CmAPP基因的敲除载体，分别利用ATMT技术转化ZS．1；得到了CmAPP基因的敲除转化子，通过其生物学性状研

5、究发现该基因对盾壳霉生长发育无显著影响；多次试验未得到Cm6Z伊．1ike基因的敲除转化子，故考虑对ZS一1T11329进行CmbZIP-like基因互补实验，已构建完互补载体，目前正在进行ArIⅥT。关键词：盾壳霉；分生孢子形成；碱性亮氨酸拉链；脯氨酰氨基酸(二肽)酶华中农业大学2012届硕士研究生学位论文ABSTRACTConiothyriumminitansisasclerofialmycoparasiteoftheplant-pathogenicfungusSclerotiniascler

6、otiorum，andalleffectivebiocontrolagentagainstSclerotiniadisease．Conidiaarethemainwayofsurvival，parasitism，anddissemination,alsoisthemaincomponentinbiocontrolagents．ConidiaplaysanimportantroleingrowthanddevelopmentofCminitans．Understandingsignalingpath

7、waysthatmodulateconidiationofmitosporicfungiisofbothpracticalandtheoreticalimportance．Inthisresearch,twoconidiationdeficientmutantsZS．1T1329andZS．1T21656ofCminitanswerestudied．n伦resultsareasfollows：MutantZS一1T11329cannotproduceconidiaonPDA，withfasterg

8、rowthrate，increasedmycelialbranch，declinedcapacityofparasiticrottoSclerotiniahyphaesclerotia．SomeofmutantsinthemutantlibrarysuchasZS一1T21656couldrestoreconidiation．MutantZS·1T21656couldnotproduceconidiawithsimilargrowthrate，parasitismandrotscl