cmavab基因在盾壳霉发育和产孢过程中的功能分析

《cmavab基因在盾壳霉发育和产孢过程中的功能分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、华中农业大学硕士学位论文CmAvaB基因在盾壳霉发育和产孢过程中的功能分析姓名：崔慧申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：姜道宏201206CmAvaB基凶在盾壳霉发育和产孢过程-lJ的功能分析摘要盾壳霉(Coniothyriumminitans)是植物病原菌核盘菌(Sclerotiniasclerotirium)的重寄生真菌，寄生核盘菌的菌丝和菌核，是作物菌核病重要的生防菌。本文以盾壳霉ZS．1菌株的T-DNA插入标记的生长缺陷型突变体ZS．1N22225为材料，克隆并验证了生长产孢相关基因CmAvaB的功能，其结果如下：与出发菌株ZS一1相比，突变体

2、ZS．1N22225菌丝致密，菌丝偏向于培养基基质中生长，生长减慢，产孢量约为出发菌株ZS．1的86％，寄生致腐菌核的能力为ZS一1的69．2％，但产抗细菌物质的能力增强。通过电镜观察发现菌丝细胞内液泡结构不完整，呈碎片状分布。在PDA中添加胡萝卜汁或核盘菌菌核碎片后，可使其产孢能力增强，产孢量增加1％．5％。实验室前期通过反向PCR获得突变体ZS．1N22225的T-DNA插入侧翼DNA片段，结合盾壳霉的全基因组序列分析，发现T-DNA插入在一个全长为3315bp的基因的启动子中间。通过Softberry进行阅读框(ORF)和蛋白编码预测，发现该基因包含3个

3、外显子和2个内含子，编码一个1071aa的蛋白。该基因在盾壳霉基因组中是单拷贝。将推定的蛋白氨基酸序列在NCBI上进行同源性比较，该序列与小球腔菌、小麦德氏霉和黄曲霉等真菌的AVBA蛋白的同源性分别为93％、96％和77％，因此在盾壳霉中将该基因命名为CmAvaB。通过RT-PCR验证CmAvaB基因在出发菌株ZS．1中第48h表达量最高，在突变体ZS．1N22225中表达量少。因此在突变体ZS一1N22225中CmAvaB基因只是部分功能破坏。为了研究该基因的功能，构建了CmAvaB基因的敲除载体，利用农杆菌介导转化的方法转化ZS．1菌株，得到了敲除转化子K

4、020、K041和K0239这3株突变体。研究发现敲除转化予生长缓慢，产孢减少且寄生能力下降。通过电镜观察发现其敲除转化了液泡结构不完整，成碎片状；由液泡形态改变造成了对渗透压与酸碱胁迫的敏感性改变。敲除转化子对O．1M山梨醇抗逆性增强，生长加快，而ZS-l在此条件下生长受阻；对氯化钠与酸碱胁迫下都敏感，生长缓慢。构建了CmAvaB基因的互补载体，转化敲除突变体K020，获得了互补转化予C6和C9。互补转化子的表型、生长速度、产孢能力与寄生能力都和出发菌株的无显著差异。表明Cm．4vaB基因与盾壳霉的生长发育相关，影响其生长、产孢和寄生能力等生长发育过程。综上

5、研究表明CmAvaB既可以维持液泡形态和功能，并在盾壳霉生长发育和产孢过程中发挥作用。关键词：盾壳霉；核盘菌；液泡；CmAvaB；生长：产孢华中农、lk大学2012届硕士学位论义ABSTRACTConiothyriumminitansisallimportantsclerotiamycoparasiticofSclerotiniasclerotiorum．andcouldparasiteanddestroyhyphaeandsclerotiaofS．sclerotiorum．ThusiSanimportantbiocontrolfungusforsclerot

6、inia．Inthisreserch，aconidiationdeficientmutantZS．1N22225ofCminitanswasstudied，andCmAvaBgene，encodingthevacuolarmorphogenesisproteinwascloned．ThefunctionofthegeneindevelopmentofC．minitanswasanalyzedusinggenedisrupionandgenecomplementaltechiques．Theresultswereasfollowed：Comparedwithth

7、ewidetypestrainZS一1，thecolonymorphologyofmutantZS．1N22225wassignificantlydifferentonpotatodextroseagar(PDA)，includinghyphaetendtogrowonculturemidia,growthsloweddown，andreducedconidiation，Theparasiticabilitytowardtosclerofiaof＆sclerotiorumWasdeclined，whiletheabilitytoproduceanti．bact

8、erialsubstancewasen