拉莫三嗪通过诱导自噬降解bace1机制的研究

拉莫三嗪通过诱导自噬降解bace1机制的研究

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1、硕士学位论文论文题目拉莫三嗪通过诱导自噬降解BACE1机制的研究研究生姓名吴昊指导教师姓名马全红专业名称神经生物学研究方向阿尔茨海默症的病理机制研究论文提交日期2015年4月拉莫三嗪通过诱导自噬降解BACE1机制的研究中文摘要拉莫三嗪通过诱导自噬降解BACE1机制的研究中文摘要目的:研究拉莫三嗪促使BACE1降解的机制,为阿尔茨海默症的临床治疗提供新的理论支持。方法:利用三个月大的APP/PS1小鼠,通过连续喂养五个月的拉莫三嗪后,把小鼠杀掉取出脑袋,把海马和皮层分离开来,分别提取组织蛋白后,检测海马和皮层中B

2、ACE1、AKT、CREB蛋白水平的变化;在HEK-BACE1-293和CHO细胞系以及海马神经元原代细胞上加入不同浓度的拉莫三嗪进行药物处理,检测BACE1蛋白以及自噬相关蛋白AKT、mTOR、s6、CREB、LC3等蛋白水平的变化;在HEK-293细胞系上加入不同浓度的拉莫三嗪进行药物处理后,提取RNA,检测BACE1以及自噬相关基因Atg7含量的变化;在CHO细胞系上转染LC3-GFP质粒,加入不同浓度的拉莫三嗪处理后,利用激光共聚焦显微镜观察拉莫三嗪对自噬相关蛋白LC3形态变化的影响。结果:蛋白印迹实验

3、结果表明拉莫三嗪能够使BACE1、p-mTOR以及p-s6的蛋白水平下调,p-AKT、p-CREB以及LC3II蛋白水平上调;PCR结果显示,拉莫三嗪对BACE1的mRNA水平没有影响,但是对自噬相关基因Atg7的mRNA水平具有上调作用;免疫荧光实验结果表明拉莫三嗪能够使LC3II点数增加。结论:我们通过本实验证明拉莫三嗪通过抑制mTOR信号通路来激活自噬来降低BACE1蛋白水平,为阿尔茨海默症的临床治疗提供新的理论依据。关键词:拉莫三嗪,BACE1,阿尔茨海默症,自噬,mTOR。作者:吴昊指导教师:马全红I

4、LamotrigineReducesBACE1ProteinLevelsthroughInductionofAutophagyAbstractObjective:ToinvestigatethemechanismofdegradationofBACE1bylamotrigineandprovideanewtheoreticalsupportfortheclinicaltreatmentofAlzheimer'sdisease.Methods:ThreemonthsoldAPP/PS1micewerefedbyl

5、amotrigineafterfivemonths,weextractedthetissueproteinsbyseparatingthehippocampusandcortexinthebrainofmice,anddetectedthechangesoftheBACE1,AKT,andCREBproteinlevelsinthehippocampusandcortex;weusedlamotriginedrugontheHEK-BACE1-293,CHOcelllinesandneurons,testing

6、BACE1proteinandautophagy-relatedproteinAKT,mTOR,changes6,CREB,LC3andotherproteinlevels;inordertodetectthechangesofBACE1andautophagy-relatedgenesAtg7,weaddeddifferentconcentrationslamotrigineonHEK-293cellsline;theLC3-GFPplasmidwastransfectedtoCHOcelllines,the

7、nweaddedthevariousconcentrationsoflamotriginetoobservethemorphologicalchangesofautophagy-relatedproteinLC3byusinglaserconfocalmicroscopy.Results:ImmunoblotexperimentssuggestthatlamotriginecanmaketheBACE1,p-mTORaswellasp-S6proteinsleveldown,andup-regulatep-AK

8、T,p-CREBandLC3IIproteinlevel;PCRresultsshowed,lamotriginehadnoeffectonBACE1mRNAlevels,butthemRNAlevelofAtg7Autophagyrelatedgeneswasup-regulated;immunofluorescenceexperimentssuggestthatlamotrigin

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